1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
1.本课题的意义甲烷是地球大气中仅次于二氧化碳的第二号温室气体，可工业利用的甲烷主要来源于天然气和厌氧发酵沼气，在甲烷氧化菌的常温常压无污染地实现甲烷的转化来有效合理地利用甲烷，必将对全球能源利用、环境保护和循环经济产生重大的影响。
t6ss系统是广泛存在于革兰氏阴性菌中的一种帮助细菌将菌体内的蛋白质透过菌体外膜转移到外环境或宿主细胞内的系统。
经研究发现甲烷氧化菌中同样存在t6ss系统基因：tssg基因。
2. 研究的基本内容和问题
1.研究的目标由于甲烷氧化菌中的甲烷单加氧酶smmo在高cu2 浓度下不表达，但是通过对野生型的甲烷氧化菌5gb1菌进行基因敲除，发现在突变体中存在一种基因tssg，属于t6ss系统基因中的一员，可能影响铜离子基因的转运。
本课题的研究目标就是获得甲烷氧化菌的突变体，并了解tssg对smmo的转录表达的影响。
2.研究内容本课题研究的是甲烷氧化菌中t6ss系统基因tssg对smmo转录表达的影响，具体有以下几个内容：a.通过电转化转座子突变、筛选获得能够在高cu2 浓度下smmo表达的突变株。
3. 研究的方法与方案
1.研究方法和方案a.甲烷氧化菌5gb1的培养和突变株筛选采用nms2培养基培养菌体，在其中注入30%的甲烷气体，密封培养，培养温度为30℃。
固体培养时在培养基中加入1.3%的琼脂粉，培养平皿置于密封罐中进行。
液体培养于250ml三角瓶中进行，抽真空，注入甲烷气体后，封口处使用密闭的橡胶塞和锡纸包扎。
4. 研究创新点
借助最新发现和开发的优良研究材料与高效研究方法，首次揭示甲烷氧化菌中影响铜离子诱导sMMO表达过程的关键分泌系统T6SS系统中的TssG，为进一步阐明完整的铜离子信号通路以及MB的生产应用打下基础。
5. 研究计划与进展
1.研究周期2017年10月2018年5月2.研究阶段2017年10月2017年11月 甲烷氧化菌的培养及突变株的筛选2017年11月2017年 1月 基因敲除以及对敲除后菌株中sMMO表达的检测2017年 3月2017年 5月 反向验证TssG对sMMO表达的影响，了解TssG的生物学功能
