p63基因克隆转化及其在肺腺癌到鳞癌转分化过程中的功能初探开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

癌症发生是一个涉及致癌基因激活和抑癌基因失活的复杂、多级化过程。

研究表明肿瘤细胞具有多种特征(hallmarks)，包括自给自足的生长信号，对抗生长信号的不敏感，抵抗细胞死亡，无限的复制能力，持续的血管生成，组织浸润和转移，避免免疫摧毁，促进肿瘤的炎症，细胞能量异常以及基因组不稳定和突变等。

这些特征同时显示在肿瘤临床相关治疗上存在巨大挑战。

2. 研究的基本内容和问题

研究目标：（1）进一步验证p63在肺腺癌和肺鳞癌组织中的表达。

（2）构建p63基因过表达载体。

（3）建立p63过表达的稳定细胞系。

3. 研究的方法与方案

（1）利用免疫组织化学技术（immunohistochemistry, ihc），检测p63在kras/p53，kras/lkb1小鼠肺腺癌和肺鳞癌中的表达。

目前已备有小鼠肿瘤组织切片以及ihc所需相关设备和技术体系。

（2）构建p63过表达载体a,设计带有合适没切位点的引物，以小鼠肺鳞癌cdna为模板，扩增p63基因。

4. 研究创新点

依托最新的关于肺癌腺癌鳞癌转化研究的小鼠模型，研究p63基因在小鼠腺癌细胞中过表达的效果，进而探究肺癌腺癌向鳞癌转化的发生过程。

因为不同的肺癌亚型在临床治疗的方案上存在较大差异，且预后效果不尽相同，关于该转化的机制研究能更好的为临床治疗和药物开发提供有价值的参考。

作为公认的抑癌基因和转录因子，p63在腺鳞癌的转分化过程的作用和分子机制尚不清楚。

5. 研究计划与进展

4月1-15日，进行克隆构建，同时利用免疫组化方法检测p63在kras/p53，kras/lkb1小鼠肺腺癌和肺鳞癌中的表达。

4月16-25日，进行病毒包装感染，获得p63过表达的稳定细胞系并验证p63过表达情况。

4月26-5月15日，检验p63过表达的稳定细胞系的生长状况和p63下游基因表达的情况等指标以衡量p63过表达的影响。