1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
霍乱弧菌（vibrio cholerae）是一种革兰氏阴性菌,能够引起严重的急性、脱水性的腹泻疾病霍乱。
在自然环境中，人类是霍乱弧菌的最终宿主，霍乱弧菌主要通过被污染的水源或食物使人类感染霍乱。
其临床症状表现为急性分泌性腹泻，大便为米泔样，并且伴有呕吐，严重者甚至会导致死亡。
2. 研究的基本内容和问题
本课题研究的目标是探究唾液酸对霍乱弧菌致病性及其肠道定殖能力的影响；探究唾液酸与n-乙酰神经氨酸裂解酶对霍乱弧菌抗ros能力的影响；地为更好地利用或克制霍乱弧菌提供方法和方向。
本实验会通过敲除霍乱弧菌唾液酸中的nana基因从而得到突变株，令其生长，利用涂布之类的方法来观察突变株的菌落形态及生长状况，并与正常菌株进行对照，比较其区别。
然后将野生型和突变型菌种分别置于不同浓度的过氧化条件下（我们采用过氧化氢），利用生长曲线测定等方法比较其生长状况，从而探究唾液酸对霍乱弧菌抗ros能力的影响。
3. 研究的方法与方案
敲除nana基因，得到突变株将突变株进行培养，使其增殖涂布，观察突变株菌落形态，与野生型比测定突变株生长曲线，与野生型比较一：将菌液灌入乳鼠或大鼠，od调至1一定时间后取出肠道或粪便，匀浆涂布，观察菌种定殖情况二：将定量的野生型也突变型放入不同浓度过氧化氢测定生长曲线，比较其区别总结唾液酸对ros的抗性1. 敲除基因。
首先我们要将霍乱弧菌中的目标基因即nana敲除，得到突变株，暂且称之为vc1776。
然后对其进行表征实验，观察突变型与野生型的表型特征异同。
4. 研究创新点
虽然目前，唾液酸代谢和细菌的致病性还没有建立直接的关系[46,37]。
但是，在研究大肠杆菌与碳源的关系时，发现对于唾液酸的吸收和降解有缺陷的菌株比野生型在粪便中菌落少很多。
这种现象表明唾液酸在细菌定殖上有一定作用[47] 。
5. 研究计划与进展
研究计划：第一， 插入转座子是目的基因失活第二， 敲除目的基因，得到真正的突变株第三， 观察突变株的表型特征第四， 测定突变型与野生型在不同过氧化氢中的生长曲线第五， 比较突变型与野生型对ROS的抗性第六， 将野生型与突变型灌入老鼠体内，进行体内实验第七， 比较两者的定殖能力的差别预期进展：第一， 得到nanA基因敲除的突变型第二， 比较突变型与野生型在正常情况下生长的区别第三， 比较二者对ROS的抵抗能力第四， 比较二者的定殖能力
