1. 研究目的与意义
黑莓为蔷薇科悬钩子属多年生藤本植物，是小果类果树，原产美洲，分布于美国和欧洲的暖温带至亚热带地区，是近年来迅速发展的世界第三代水果，其果实柔嫩多汁、营养丰富、色泽宜人，被誉为黄金水果，富含锌、硒等多种矿物质，氨基酸种类齐全，VE含量高于苹果和柑橘，且花色苷和总酚含量较其他浆果中高，而多酚类化合物在体内通过发挥抗氧化作用，可以降低心脏病、癌症和其他慢性病的发生率。研究报道黑莓不同品种间花色苷含量有很大的差别，但其抗氧化能力是否有差别鲜有报道。为充分利用黑莓植物资源，本研究采用不同方法提取黑莓花色苷，通过大孔树脂分离纯化和真空冷冻干燥制备花色苷粉末状样品，对其体外抗氧化作用进行比较研究，旨在为天然抗氧化剂的开发提供理论依据。
2. 国内外研究现状分析
见附页
3. 研究的基本内容与计划
研究内容 1实验步骤 1.1黑莓花色苷粗提液的制备 冷冻黑莓于4℃解冻10h后蒸汽热烫3min，用组织捣碎机破碎30s得到黑莓浆。果胶酶和果浆复合酶制剂（参照厂家提供的不同酶的反应最适条件）分别用去离子水稀释5倍后加入黑莓浆中，45℃保温搅拌2h，酶解后加热到90℃灭酶活5min，冷却后，4500r/min离心15min，收集上清液，得黑莓汁即为黑莓花色苷粗提液，存于4℃冰箱中备用[13]。 1.2花色苷含量的测定 黑莓花色苷的测定参考Worlstad等的方法[14,15]进行。取两个10mL容量瓶各加入1mL花色苷提取液，分别用pH1.0缓冲液(0.2mol/LKCl:0.2mol/LHCl=25:67(V/V))和pH4.5缓冲液(1mol/LNaAc:1mol/LHCl:H2O=100:60:90(V/V/V))定容，避光静置2h，分别在520nm和700nm下测吸光值A。花色苷含量按下式计算(结果以矢车菊-3-葡萄糖苷计)： AMWDF1000 黑莓汁花色苷含量（mg/L）= ε1 式中：A=(A520nm－A700nm)pH1.0－(A520nm－A700nm)pH4.5，MW为矢车菊3-葡萄糖苷的相对分子质量449.2，DF为稀释倍数10，ε为矢车菊3-葡萄糖苷的摩尔消光系数26900，1为比色皿的光程长度。 1.3大孔树脂预处理 将大孔吸附树脂在无水乙醇中浸泡24h，除去树脂中的杂质，然后进行湿法装柱。装好后，用蒸馏水以1.6mL/min的流速冲洗树脂柱，直到无乙醇残留，然后以同样的流速，将5%的HCl通过树脂柱，2h后再以蒸馏水洗至中性，接着以1.6mL/min的流速，将5%的NaOH水溶液通过树脂柱，2h后再以蒸馏水洗至其洗出液在280nm下无吸收，备用。 1.4动态吸附与洗脱 将一定浓度的黑莓汁通过AB-8大孔树脂柱，流速为1.6mL/min，流出液用接收器接收，每10mL收集一次流份，测定其吸光值，当流出液的浓度达到上样液浓度的1/10时，认为已经有花色苷类物质透过，停止上样，绘制泄漏曲线[16,17]。用蒸馏水洗脱除去水溶性杂质，然后用体积分数为75%乙醇溶液进行洗脱，洗脱流速1.0mL/min，每100mL收集一份，测定其吸光值，绘制洗脱曲线。收集洗脱液，于45℃下真空旋转蒸发浓缩，冷冻干燥得纯样品。按下式计算产品得率和花色苷回收率： 样品质量 产品得率（%）=100 黑莓果质量 1.5清除DPPH自由基试验 抑制率计算公式为： 1.6抑制羟自由基能力 抑制羟自由基能力采用南京建成生物有限公司的试剂盒。Fenton反应时最常见的产生羟自由基的化学反应，H2O2的量和Fenton反应产生的羟自由基量呈正比，当给予电子受体后，用griess试剂显色，形成红色物质，其呈色欲羟自由基的多少成正比关系。定义每毫克样品在37℃下反应1min，是反应体系中的H2O2浓度降低1mmol/L为一个抑制羟自由基能力单位。 |
研究计划： 第一阶段13周：查资料，确定测定方法 第二阶段25周：试验材料的准备并进行预实验 第三阶段612周：试验数据的测定分析 第四阶段1316周：试验结果分析、毕业论文撰写、答辩 |
4. 研究创新点
不同原料与制备方法所得花色苷抗氧化活性差异显著，为此，本文研究大孔树脂AB-8对黑莓花色苷的静态吸附解吸效果及动态吸附性能，并对纯化后的花色苷进行体外抗氧化性研究，旨在为天然抗氧化剂的开发提供理论依据。
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