辣椒成熟衰老期间蛋白质双向电泳技术体系的建立开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

甜椒（capsicum annuum l.）又名菜椒，柿子椒，灯笼椒，是茄科辣椒属辣椒的一个变种，分布于中国南北各地，属于非人工引种栽培类型植物[1]。

甜椒果实富含维生素c，微量元素和维生素k，并且其口感独特，受到广大消费者的喜爱，更是百姓餐桌上的常见蔬菜。

甜椒果实在采后仍是一个生命有机体，其生理代谢活动依旧十分旺盛，贮运过程中易由于环境因素影响出现失水、衰老、腐烂等现象[2,3]，严重影响了果实的食用品质和商品性。

2. 研究的基本内容和问题

目标：本实验主要建立适用于甜椒果实总蛋白分析的双向电泳体系，以期可以利用蛋白质组学研究与成熟衰老相关的功能性蛋白或者基因的变化，为甜椒果实成熟衰老过程中各个生理生化过程分子机理的研究提供全新的技术方法和证据，为生产实践中开发甜椒的保鲜技术提供理论指导。

内容：本试验以甜椒果实红方为实验材料，对其果实总蛋白制备方法、蛋白提取液的ph值、总蛋白的上样量、ipg胶条的ph范围及等电聚焦程序进行条件优化，建立甜椒果实总蛋白质双向电泳优化体系。

拟解决的关键问题：研究不同蛋白样品的提取方法、蛋白提取液的ph值、上样量、使用的ipg胶条ph范围对甜椒果实双向电泳图谱的影响，建立适用于甜椒果实蛋白质组学研究的双向电泳体系。

3. 研究的方法与方案

（1） 蛋白质制备方法:本实验分别采取tca-丙酮法，tca丙酮-sds法，酚提法和tca丙酮-酚提法对甜椒果实的蛋白质进行制备；（2） 蛋白质的溶解；（3） 蛋白质含量的测定：采用bradford方法（略有修改）进行蛋白质含量的测定；（4） 双向电泳：先在等电聚焦仪上进行第一向等电聚焦，聚焦结束的胶条，立即进行ipg胶条的平衡及第二向sds-page，然后采用改良胶体考马斯亮蓝g-250染色法进行染色，用脱色液脱色至蛋白点清晰可见，凝胶背景清晰为止；（5） 凝胶图像采集与分析：采用美国ge公司凝胶成像系统对凝胶进行图像扫描，并用pdquest 2-de 8.0分析软件对图像进行分析；（6） 数据处理与分析：双向电泳实验进行三次重复实验，实验数据采用excel软件进行误差分析，数值表示为平均值标准误差。

近年来，果实采后相关的蛋白质组学的研究已经开展起来，并且有较显著的进展。

利用越发成熟的双向电泳技术将会为果蔬采后生理的研究带来更多的便利，然而原料品种的差异性需要针对性的优化双向电泳体系，以便目标对象获得优质的电泳图谱和可靠的实验结果。

4. 研究创新点

根据国内外文献报道来看，对于甜椒果实采后的相关研究主要集中在应用方面，例如不同的保藏方式对甜椒果实的影响，研究内容涉及到货架期、感官品质、抗氧化成分、能量代谢产物等方面。

目前对于辣椒蛋白质组学的研究很少，本研究期望通过甜椒果实总蛋白制备、双向电泳程序、上样量等甜椒果实总蛋白双向电泳体系建立为后续果实成熟衰老机理和调控机制的深入研究提供技术平台。

5. 研究计划与进展

2014年1月2014年2月 文献查询和开题报告的撰写2014年3月2014年4月 实验开展2014年5月2014年6月 结果分析和毕业论文撰写