“霞晖5号”果实成熟期间GPX基因的克隆开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

植物体内活性氧（reactive oxygen species，ros）产生于植物代谢中的需氧组织，正常生理条件下植物体内ros的含量通过植物体内的各种抗氧化途径调控并维持在一定水平。

当植物受到外界环境的胁迫时，会诱导产生过量的ros，植物体内失衡的ros 水平会扰乱机体的稳态同时会使机体内的重要生命物质发生氧化，从而产生毒害。

植物体内有效清除ros的机制分为酶促和非酶促两类。

2. 研究的基本内容和问题

查阅各种相关资料，了解掌握GPX基因克隆的大致流程与步骤，先进行保守区域片段的基因克隆，再利用各种技术手段获得全场序列。

在实验过程中，有几方面的问题需要解决：1.设计的引物是否可行；2.提取RNA时是否受到其他物质的污染；3.目的基因与载体是否能成功连接。

3. 研究的方法与方案

通过trizol法提取总rna、cdna第一链的合成、pcr反应、对扩增产物进行1%的琼脂糖凝胶电泳、凝胶电泳中dna片段的回收、dna片段与克隆载体的连接、大肠杆菌dh5α感受态细胞的制备、重组质粒dna的转化、菌液pcr鉴定目的片段、送去测序公司鉴定等步骤完成保守区域片段的基因克隆。

利用5ˊrace和3ˊrace对末端进行测序，最后拼接取得全长。

通过参考其他植物gpx基因克隆的资料以及利用实验室的各种器材完成实验。

4. 研究创新点

植物GPX研究比较晚，直到最近几年，在植物中才开展了GPX功能研究，植物的这些酶在结构、底物的特异性及植物组织的分布上与动物的GPX有很大的不同，而对于桃子GPX的基因克隆更是空白。

以桃为原料，克隆GPX基因，为研究桃GPX的作用以及基因的表达奠定基础。

5. 研究计划与进展

1查阅相关文献，了解国内外研究现状，设计实验方案2 购买材料，对材料进行处理和冻存3 设计引物，进行GPX基因克隆4 撰写论文等