1. 研究目的与意义
内容：对丁半合剂的剂型已经生产工艺的改进，同时进行丁半颗粒的中质量标准与稳定性等研究。药材选择研究，包括建立组方药材的质量标准。研究提取分离工艺参数，制定工艺路线。对各组分进行含量测定研究，建立科学可控的质量标准。制剂稳定性研究，制定有效期。
意义：丁半合剂来源于江苏省中医院的临床验方，临床疗效非常的确切，清热解毒效果极佳，堪比抗生素且没有抗生素的副作用及耐药性。但临床以合剂形式使用多年，存在很大的不足之处：产品为多剂量包装，病人服用量大，且口感不好，携带、保存不便等，直接影响了临床使用量。改进后的颗粒剂型可以很好解决上述缺点，改善药物口感，减少服用剂量，更好的缓解患者症状，缩短病程，且方便携带和保存，同时也利于儿童和肠胃反应较大、口感耐受较差的病人使用。并且，参考2015药典方法建立组方药材及制剂的质量标准，提高了质量标准控制的水平。
2. 文献综述
1.感染性疾病（infectious diseases）的现代研究进展
感染性疾病（infectious diseases）指细菌、病毒、真菌、寄生虫等病原体入侵人体所引起的局部组织和全身性炎症反应，它是临床几大疾病之一，严重危害着人类的生命与健康。
现阶段西医的抗感染治疗多采用抗生素、抗菌药物、抗病毒药等。
3. 设计方案和技术路线
研究内容一：药材选择的研究
1．药材的选择与质量控制研究
药材的质量关系整个制剂的质量及临床的安全有效性。中药材的质量受制于生长条件(如阳光、灌溉、施肥、土质、地理环境，等等)，采收季节，加工方法，贮藏运输等多种因素，应严格按药典标准对药材的质量进行检验。因此，对药材质量的选择与质量控制研究是首要任务。按《中华人民共和国药典》逐项检查，完全符合要求后方可入药。
本方中紫花地丁、半边莲均为《中华人民共和国药典》收载品种。紫花地丁为堇菜科植物紫花地丁Viola yedoensis Makino 的干燥全草。半边莲为桔梗科植物半边莲Lobelia Chinensis Lour.的干燥全草。
从研究起始就注意对药材质量（药典标准内容及）开展质量相关性研究，不断进行相关资料的结累。药源产地、产地的资源情况、供药人、供销合同、药材验收质量分析报告、产地种植资料(包括土质分析，杀虫剂应用，施肥等)、种植地的录象或照片等、采集部位及其要求、产地加工资料(干燥方法、浸润条件、切制方法、饮片干燥方法)、贮藏条件、运输要求等。从而固定中药材的品种、产地和采收期，使选用的中药材质量稳定、可控，保证生产用原料的质量。
2.药材有效组分HPLC图谱的建立
根据文献记载：组方药材的有效成分，以芹菜素、木犀草苷等对照品峰为参照峰，建立混合药材的对照指纹图谱，作为工艺研究中评价指标之一。以保证工艺研究中药药效和质量的稳定性。
2.1 样品、仪器与试药
高效液相色谱仪Agilent 1260，四元泵（G1311A），柱温箱（G1316A），DAD检测器（G1314A），工作站（Chemstation），10万分之一电子分析天平(BP-211D型，德国Sartorius)；KQ-1000E型医用超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；HH-4数显型恒温水浴锅(江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司)。
选用不同批次符合标准要求的组方药材
2.2 混合药材提取液的制备
将药材分别粉碎至过60目筛，按处方比例分别称取药材粉末，精密称定，精密加入甲醇100ml，称重，超声提取30分钟，用甲醇补足重量，滤过，弃去初滤液，取续滤液，用0.45μm针头过滤器过滤，作为供试品,记录色谱图。制备10批次样品，用指纹图谱相似度评价软件评价图谱的相似性，确认对照指纹图谱。
2.3 HPLC分析条件的研究
色谱条件 流动相选择
2.3.1色谱条件的优化
检测波长的确定
参考芹菜素、木犀草苷可见吸收波长，分别在不同波长下进行HPLC分析检测，选择上述三种指标成分分离较好，出峰较多，并且主要色谱峰的吸收度较大，各色谱峰的吸收度差异较小，所得图谱指纹性较强，确定检测波长和流动相。
2.3.2不同色谱柱的比较
考察了几种不同色谱柱的分离效果，选择分析用的色谱柱。
2.4方法学考察
2.4.1 精密度试验
2.4.2 稳定性试验
2.4.3 重复性试验
2.4.4 HPLC指纹图谱中主要色谱峰的指认，确定对照指纹图谱，用于工艺研究中质量控制。
研究内容二：工艺研究
1. 处方药材分析
（1）组方药材化学成分及相关生物效应概况
紫花地丁：含有多种化学成分，并具有较强的药理活性和较大的利用价值。目前，已经从紫花地丁药用植物中分离得到70多种化合物，包括黄酮类化合物27个、香豆素类化合物16个、有机酸类化合物16个和其他类化合物13个。体内外实验研究表明，紫花地丁的粗提取物具有广泛的药理作用，尤其是在抗炎、抑菌、抗病毒和抗肿瘤方面效果显著[1]。
半边莲：王培培等从半边莲95%乙醇提取物中分离鉴定了15个化合物，其中12个黄酮类化合物：槲皮素（1）、芦丁（2）、木犀草素（3）、芹菜素（4）、橙皮苷（5）、槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷（6）、槲皮素-7-O-α-L-鼠李糖苷（7）、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷（8）、穗花杉双黄酮（9）、柚皮素（10）、橙皮素（11）、泽兰黄酮（12）；3 个香豆素类化合物：5, 7-二甲氧基香豆素（13）、异东莨菪素（14）、蒿属香豆素（15）。化合物6～12 为首次从半边莲属植物中分离得到，化合物5、13、14 为首次从半边莲中分离得到[2]。半边莲总黄酮提取物具有一定的抑菌活性，对革兰氏阴性菌的抑制作用大于革兰氏阳性菌，低浓度下对青霉菌和酵母菌抑制效果不明显[3]。
[1]李永生,何希瑞,杨燕，等.紫花地丁化学成分与药理活性研究新进展[J]，环球中医药2013，4（4）:313-318.
[2]王培培，罗俊，杨鸣华.半边莲的化学成分研究[J]，中草药2013，4（7）：794-797.
[3]蒋琼凤，温拥军，袁志辉.半边莲总黄酮提取工艺及抑菌活性的研究天然产物
研究与开发[J].天然产物研究与开发 2015，27:865-869.
根据医院制剂申报的要求以及临床使用情况的反馈，采用传统的提取工艺即水煎煮，可以将方中紫花地丁、半边莲药材在制剂中的主要成分黄酮类大部分提取完全，所以在工艺工艺路线设计时，应考虑首先采用原合剂工艺：水煎煮。
2．剂型的选择
丁半合剂处方来源于我院名老中医的临床验方，临床疗效确切，清热解毒效果极佳。临床以合剂形式使用多年，产品为多剂量包装，存在病人服用量大，口感不好，合剂携带、保存不便等不足，直接影响了临床使用量。本研究拟将合剂经一步制粒法改成颗粒剂，便于服用和保存，且较片剂和丸剂吸收快，可以很好解决上述缺点，改善药物口感，减少服用剂量，更好的缓解患者症状，缩短病程。同时方便儿童及口感耐受较差的病人使用。
3.工艺路线设计依据
根据原丁半合剂处方工艺采取水提工艺。
根据各药物主要成分的性质，对提取液采用离心法进行纯化。
根据工厂设备条件，药液采用一步制粒法制成颗粒剂。
3.1 提取工艺设计
根据原丁半合剂处方工艺采取水提工艺。
根据剂型选择制剂工艺路线。
3.2 提取工艺路线
紫花地丁、半边莲
水煎
煎液
3.3 提取工艺条件的筛选
3.3.1 紫花地丁、半边莲水提工艺研究
单因素考察水提药味的煎煮次数，以浸膏得率和主要有效成分的含量为指标确定水提次数。
表3 煎煮次数的选择试验
煎煮次数 浸膏得率（%） 主要有效含量（%）
第一、二次煎煮
第三次煎煮
第三次所占比例（%）
紫花地丁、半边莲药材水提工艺的优选
根据文献报道，紫花地丁及半边莲中的黄酮类成分具有显著的抗菌、抗病毒作用，与本方功能主治密切相关，因此，在提取工艺中，以浸膏得率、黄酮类成分芹菜素、木犀草苷含量为考察指标，采用正交试验对提取的加水量、浸泡时间、煎煮时间进行探讨。
表4 煎煮试验因素水平表
水平 因 素
加水量（倍）A 浸泡时间（h）B 煎煮时间（h）C
1
2
3
表5 试验结果
试验号 因 素 浸膏得率 有效成分含量 综合评分
A B C D （%） （%）
1 1 1 1 1
2 1 2 2 1
3 1 3 3 3
4 2 1 2 3
5 2 2 3 1
6 2 3 1 2
7 3 1 3 1
8 3 2 1 3
9 3 3 1 1
3.4 提取液精制工艺研究
紫花地丁、半边莲药液仅需除去固体微粒或很大的分子，故宜采用机械分离除杂。
根据各药物主要成分的性质，对提取液采用离心法进行纯化。
3.5 中间体质量标准
制定中间体的质量标准：粒度、水分、干燥失重、溶化性等以获得均一稳定质量可控的中间体为目标。
3.6 辅料与矫味剂的选择
辅料对制剂造型有着举足轻重的作用，直接影响制剂质量。选择合适的辅料可制出外观良好，质量稳定，释放性能好，病人容易接受的制剂。
因本品组方药味较苦且有特异气味，需加入适宜的矫味剂，以增加患者的顺应性。
4. 成型工艺研究
一步制粒又称沸腾制粒、流化喷雾制粒，是指利用气流使药粉呈悬浮流化状态，再喷入粘合剂液体，使粉末凝结成粒的方法。该技术为混合、制粒、干燥操作一步完成的新型制粒技术，可大大减少辅料用量，干浸膏在颗粒中的含量可达50%～70%[8]；生产效率高，便于自动控制。但动力消耗大，极细粉不易全部回收等。
影响一步制粒的因素较多，结合生产实际，并根据预试验和文献资料选取辅料用量、浸膏相对密度、进料速度、进风温度、进风量、雾化压力等因素进行考察，以确定相关的工艺及技术参数。
5.中试研究
应为制剂处方量的10倍以上。应提供至少三批中试生产数据，包括投料量、半成品量、质量指标、辅料用量、成品量及成品率等。
研究内容三 质量标准研究
中药的质量主要体现在质量标准中的鉴别、检查和含量测定项，其内容的设置和检验方法是构成中药质量标准个性化的主要标志，也是药品质量可控性的标志。
1.组方药材的鉴别研究
试验时设阳性对照和阴性对照。阳性对照尽量使用对照药材，其有效成分明确的，有化学对照品的，要同时使用化学对照，以提高鉴别的准确性。采用薄层色谱方法，以对照药材为对照，对组方中的各药味进行鉴别试验。收载薄层色谱鉴别应根据分离度好、图谱清晰、斑点明显、重现性好的要求，并经试验验证、研究出合适的层析板、展开剂及显色方法等色谱条件。
2.含量测定
本方含有两味药材，为紫花地丁和半边莲，抗菌抗炎抗病毒有效成分主要为黄酮类成分，故选择芹菜素和木犀草苷作为含量测定的成分。
方法的选择：HPLC测定方法成熟。
方法学考察：按中国药典《中药质量标准分析方法验证指导原则》规定方法进行研究
检查项目：根据选择的剂型按中国药典规定的剂型项下检查。
3.质量标准起草说明
4. 工作计划
2022.1-2022.2 进行了单因素及正交试验优选提取工艺试验
2022.2-2022.3优选工艺验证并进行中试试验
2022.3-2022.4对中试样品进行质量标准研究及初步稳定性考察
5. 难点与创新点
丁半合剂为医院成熟制剂，在临床疗效非常确切，清热解毒效果极佳，堪比抗生素，且无抗生素的副反应及耐药性。本课题采用现代化工艺研究手段来开发临床疗效非常确切的中药新制剂。其制备工艺和质量标准研究都将参照中国新药研究的方法、标准和要求进行研究制定，提高了工艺水平；过去的研究，一般缺乏定量研究，而且定性研究也只有基本要求，本设计中对方中的每味药材都建立定性检识的方法，并且进行定量研究，提高了质量标准控制的水平。
