ACSL4在千层纸素A抗结肠癌细胞增殖及炎症中的作用研究开题报告

1. 研究目的与意义

研究现状及发展趋势：

结肠癌是临床常见的一种消化道系统恶性肿瘤，严重威胁人们的健康^[1]。目前临床上结肠癌的治疗方法主要包括手术、放化疗及免疫疗法等，但这些方法都有较为明显的缺点，如手术切除只适应于尚未发生转移患者，对于已转移的患者无效^[2]；化疗药物在临床经常会引起毒副作用，包括神经毒性及肾毒性等^[3]；近年来兴起的免疫疗法尤其是免疫检查点抑制剂，临床研究发现其对大部分实体瘤不响应^[4]。因此，深入挖掘结肠癌的发病机理，并找寻有效的抗结肠癌药物迫在眉睫。

长链脂酰辅酶a合成酶4（acsl4）是脂酰辅酶a合成酶家族的成员之一，在花生四烯酸的代谢中发挥关键的作用，能够将脂肪酸转换成脂肪酸脂酰辅酶a酯^[5]。研究发现，acsl4在类固醇生成组织中过量表达，而在一些胃肠系统如肝脏中低表达^[6]。此外，研究还发现acsl4的表达失调与多种恶性肿瘤的发病密切相关，如乳腺癌、胃癌、结肠癌等^{[7, 8]}。有趣的是，acsl4在胃癌中发挥抗肿瘤作用^[9]，而在乳腺癌及前列腺癌的发生及转移中则发挥促癌作用^[10]，表明acsl4与癌症发生之间的关系较为复杂。

2. 研究内容和问题

基本内容：

western blot检测千层纸素a对hct116细胞acsl4的蛋白表达影响；采用过表达acsl4的质粒转染hct116细胞，通过western blot进行过表达效果的验证；采用cck8实验研究过表达acsl4对千层纸素a抑制hct116细胞增殖的影响；采用克隆形成检测过表达acsl4对千层纸素a抑制hct116细胞克隆形成影响；采用elisa试剂盒检测过表达acsl4对千层纸素a抑制hct116细胞炎症因子分泌的影响；采用western blot检测过表达acsl4对千层纸素a抑制hct116细胞cox-2及inos蛋白表达的影响。

预计解决的难题：

3. 设计方案和技术路线

研究方法：

1.cck8检测细胞增殖

将转染ahcy干扰及过表达质粒的细胞，以每孔5000个种入96孔板中，共4块，分别于0、24、48、72 h加入10 μl的cck8共培养2 h，于450 nm处测od值。

4. 工作计划

研究工作条件：

1.项目成员已经熟练掌握本实验所需要的实验技术；

2.本项目研究将依托于南通大学药学院药理平台，实验室具备常规开展细胞学及分子生物学等实验项目的条件，为本研究有关项目的实施提供保障；指导老师长期从事肿瘤基础药理研究，擅长各种肿瘤模型的构建，具有较好的分子生物学研究基础，对整个课题研究具有很好的把控。