小鼠抗体IgG1 Fc区在真核细胞中的表达以及鉴定开题报告

1. 研究目的与意义

癌症治疗一直是临床医疗领域未攻克的难题，随着科学技术的发展，癌症的治疗方法也在迭代更新，癌症治疗中面临的最为主要困难之一为癌细胞的免疫逃逸，因此免疫治疗成为近年来癌症治疗方法的研究热点。

在免疫治疗中，对于抗原和抗体的研究必不可少。

抗体，又称免疫球蛋白（immunoglobulin，简称ig），是一种主要由浆细胞分泌，被免疫系统用来鉴别与中和外来物质如细菌、病毒等病原体的大型y形蛋白质。

2. 国内外研究现状分析

近几年来免疫治疗的兴起，医学研究者开始通过多种途径应对肿瘤细胞的免疫逃逸，以重新唤起人体内免疫系统的功能实现杀伤肿瘤细胞的作用，从而治疗癌症。

这样在恶性肿瘤治疗过程中，既可以杀死恶性肿瘤细胞，也可以刺激宿主的免疫应答以监视残存的肿瘤细胞。

因此在许多恶性肿瘤的治疗中免疫疗法已经成为恶性肿瘤治疗的中心环节。

3. 研究的基本内容与计划

研究内容：（1）查阅文献，了解抗体相关知识，了解癌症发生的病理过程、治疗手段，及IgG1 Fc区与 Fc受体研究进展等相关知识，学习相应的方法和技术；（2）学习并掌握掌握相关动物细胞培养方法； （3）学习并掌握表达载体转染动物细胞相关方法，构建小鼠抗体IgG1 Fc区真核细胞表达体系；（4）学习并掌握Western Blot技术；（5）通过相关蛋白检测方法对不同的真核细胞表达体系进行比较和选择，根据实验结果，调整实验方法，建立稳定的小鼠IgG1Fc表达体系；（6）通过单克隆筛选优化小鼠抗体IgG1 Fc区真核细胞表达体系。

研究计划： （1）收集相关资料，了解抗体相关知识，了解癌症发生的病理过程、治疗手段，及IgG1 Fc区与 Fc受体研究进展等相关知识（1-2周）；（2）了解相关动物细胞特性，并掌握其培养方法，建立细胞系（3-4周）；（3） 掌握表达载体转染动物细胞相关方法，通过将构建好的表达载体转染动物细胞，构建小鼠抗体IgG1 Fc区真核细胞表达体系（5-6周）；（4）学习并掌握Western Blot技术，对细胞培养液进行蛋白表达检测（7-8周）；（5）通过相关蛋白检测方法对不同的真核细胞表达体系进行比较和选择（9-10周）； （6）根据实验结果，调整实验方法，建立稳定的小鼠IgG1Fc表达体系（11-12周）；（7）通过单克隆筛选优化小鼠抗体IgG1 Fc区真核细胞表达体系（13周）；（8）进行数据整理分析并补充必要的试验（14周）；（9）撰写毕业论文（15-16周）。

4. 研究创新点

过去通常使用原核细胞作为表达载体，但在原核生物基因表达时，因其不含内含子，缺乏转录后的加工系统所以无法正确折叠。

在本次研究中，采用高等动物真核细胞作为表达载体，真核系统具有合适的糖基化修饰系统，可直接合成具有生物活性的蛋白。

本研究中，我们尝试了两种动物细胞。