prm1-pET29a大肠杆菌表达载体的构建与表达开题报告

 2021-11-05 07:11

1. 研究目的与意义(文献综述包含参考文献)

1.1 细胞融合细胞融合在自发或人工诱导下,两个不同基因型的细胞或原生质体融合形成一个杂种细胞。

融合过程在融合膜的组成,生物学环境和调节机制方面差异很大,但过程是相似的。

细胞融合前,质膜之间的特征距离由特定的细胞粘附蛋白控制,范围在十纳米到几十纳米不等。

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2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案

问题:构建prm1-pgap毕赤酵母表达载体,目标产物表达纯化手段:材料:pichia pastoris gs115,质粒pgap(g418抗性)1.目的基因的合成在ncbi上提供的prm1蛋白编码基因的dna序列,委托生物公司优化并合成编码prm1蛋白的基因prm1,并克隆至gap启动子下游,构建重组质粒。

2.重组质粒的提取与酶切 取成功转入pgap-prm1重组质粒的克隆宿主(一般为dh5α),接种于含5ml lb培养基的试管中,37℃,200rpm培养过夜,用质粒提取试剂盒提取重组质粒,超微量紫外分光光度计定量。

取一定量重组质粒,使用限制性内切酶bamh i酶切重组质粒,使其线性化。

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