水杨酸对梨果实石细胞木质素合成的影响开题报告

全文总字数：5411字

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1 梨的现状分析梨属于蔷薇科苹果亚科梨属（pyrus），是一种重要的果树作物，在中国有超过两千年的栽培历史(rom and carlson, 1987)。

全世界范围内一共发现了22种梨属种类，其中白梨（p. bretschneideri）、砂梨（p. pyrifolia）、秋子梨（p. ussuriensis）、新疆梨（p. sinkiangensis）和西洋梨（p. communis）是五大栽培种类(vavilov, 1952)。

白梨、砂梨、秋子梨、新疆梨由于主产区在中国、日本等亚洲国家，所以也被统称为“东方梨”；而西洋梨是西方国家的主要栽培种类，所以也被称为“西方梨”。

2. 研究的基本内容和问题

1 研究目标（1）明确不同种浓度水杨酸溶液对梨果实石细胞木质素含量的影响；（2）获得最佳处理效应的浓度，并探究水杨酸对梨果实石细胞木质素含量影响的作用机理。

通过上述研究，为梨果实品质改良提供理论依据和实践经验。

2 研究内容1、sa处理梨果实2、处理后果实采集、保存3、间苯三酚染色果实切片4、盐酸处理测定石细胞含量5、溴乙酰法测石细胞木质素含量6、荧光定量检测3 拟解决的关键问题（1） 提高激素处理梨果实的效果。

3. 研究的方法与方案

1 实验方案1、 研究材料处理及保存：研究材料有砀山酥梨、鳄梨、油酥、雪青、桂冠、面包梨、杭青、柠檬黄等多个品种。于盛花后15天和21天分别喷施浓度为 0nM/L，1nM/L，2nM/L，3nM/L，4 nM/L，5nM/L的SA溶液。于盛花后35天采回样品保存，剩余果实用于测定石细胞含量。2、 梨果实果肉的徒手切片用间苯三酚-盐酸染色：（1） 首先用30%盐酸溶液（V/V）处理1分钟；（2） 12%间苯三酚溶于95%乙醇（W/V）；（3） 再滴到已经过盐酸处理的切片上，染色7分钟；（4） 最后滴上足量的0.4M碳酸氢钠溶液终止反应。如果细胞壁中含有木质素，则会被间苯三酚-盐酸溶液染成紫红色；如果没有，则不会被染色。3、盐酸处理法测石细胞含量取果实食用部分，按四分法取样100g，加蒸馏水打浆。再用蒸馏水稀释匀浆液，搅拌后室温静置30min，弃去漂浮物，用蒸馏水洗涤。重复以上步骤直至石细胞与其他细胞碎片分离，烘干后称重石细胞质量。4、 溴乙酰法测定石细胞木质素含量（1）称取0.01g烘干的石细胞，用95%乙醇研磨，转到2mL离心管中，定容至2mL,璃心弃上清。（2）用95%乙醇洗三次，再用乙醇-正乙烷混合液（体积比 乙醇：正乙烷=1：3）洗三次，离心弃上清，吹干后转移到10mL离心管。（3）加2mL25%溴乙酰醋酸溶液（体积比 溴乙烷：冰醋酸=1：3；最好现配现用）与70℃反应30min，加入0.9mL 2mol/L NaOH终止反应。（4）加5mL冰醋酸和0.1mL 7.5mol/L氯化羟胺，并用冰醋酸定容至10mL（5）280nm处测定吸光值 （可用酶标仪）5、 实时荧光定量检测

具体方法参照说明书

2 技术路线

3 可行性分析

（1）指导老师所在的团队多年来一直从事梨方向的研究，对实验操作和各种数据的测定都能提供较完善的方法。

（2）所在的梨实验室是我校作物遗传与种质创新国家重点实验室的一部分，具有良好的仪器设备等实验研究条件。

（3）本人热爱园艺专业，有严谨的实验操作规范，并且通过之前SRT实验的锻炼，已经十分熟悉基本的实验操作。

4. 研究创新点

目前没有水杨酸对梨果实石细胞木质素影响方面的研究。

本实验将通过水杨酸处理果实，结合生物信息等手段，探究水杨酸影响梨果实石细胞木质素合成的作用机理，为梨果实的品质性状和遗传改良提供理论依据和技术手段。

5. 研究计划与进展

本项目具体进度安排如下：

2018.3.28——盛花期，准备实验处理用具。

2018.4.12——第一次sa溶液喷施处理