列净类药物微球的构建及体外释放研究文献综述

依帕列净PLGA缓释微球的制备与体外释放

绪论

糖尿病是一种常见的人体代谢控制障碍疾病。其以血糖升高为起点引起的一系列并发症诸如尿糖、肥胖、脂质代谢障碍、酸中毒，并可能合并高血压心脏病等顽固性疾病极大地降低了患者的生活质量。随着生活水平的提高我国的糖尿病发病率数十年来逐步上升，至2013年以突破10%，现存糖尿病患者已达1.1亿以上，成为全球糖尿病患者最多的国家。并呈现出发病年龄年轻化、病情知晓率低治疗率低、患者预期寿命延长、防治水平地域差异大等特征^【1】。糖尿病病程的长期性要求患者必须常年服用降糖药物，我国庞大的患病群体提供了糖尿病药物巨大的市场空间，同时也急迫要求提高药物的研发生产水平。根据发病原因糖尿病可分为Ⅰ型和Ⅱ型，Ⅰ型患者胰岛功能先天障碍，在青少年时期便发病。Ⅱ型患者多因后天因素导致胰岛功能水平下降或机体对胰岛素不敏感，是现存糖尿病患者的主力。现有科技水平无法治愈糖尿病，治疗以补充胰岛素（胰岛素及类似物）或促其分泌（磺脲类药）、提高组织细胞血糖利用率（二甲双胍等），降低葡萄糖胃肠吸收（阿卡波糖）为主。这些药物仍有过度依赖胰岛素相关途径、胃肠反应较大（阿卡波糖）、药物合用禁忌多等诸多不足之处。

肾脏是人体吸收葡萄糖排泄的最主要途径。健康人群在不过量摄取葡萄糖的情况下，血糖会被肾小球滤过形成原尿，再重新被肾小管全部吸收，最终尿液中不含葡萄糖。肾小管对葡萄糖重吸收的部位几乎全部集中在近曲小管。该过程主要由肾小管管腔细胞上的钠葡萄糖共转运蛋白(SGLT)驱动。管腔细胞钠钾泵泵出细胞内Na ，原尿与管腔胞浆间形成Na 浓度差，钠葡萄糖共转运蛋白借助这种浓度差顺梯度转运Na ，并利用化学梯度力同时转运葡萄糖。钠葡萄糖共转运蛋白(SGLT)有多种(SGLT1和SGLT2等)，其中S G L T2是近曲小管转运葡萄糖的主力，其吸收葡萄糖占重吸收总量的90%左右。因而SGLT2蛋白抑制剂是一条治疗Ⅱ型糖尿病的新途径，通过抑制葡萄糖重吸收提高其排泄量，既可以在短时间内降低血糖浓度。又可降低血液中Na 浓度从而解除血管内皮细胞紧张性降低血压。对于常见的糖尿病并发症如心力衰竭、高血压等均有一定的缓解作用。同时这种抑制剂直接作用于肾小管与胰岛素效应无关，对于普遍有胰岛素抵抗的Ⅱ型糖尿病患者来说理论上均有疗效。依帕列净（empagliflozin）是勃林格殷格翰制药公司和礼来公司联合开发的一种新型SGLT2抑制剂。现已被F D A批准与利拉利汀用于Ⅱ型糖尿病的联合治疗^【2】。临床实验显示其具有良好的降血糖、降血压、控制糖尿病人体重的疗效。与胰岛素、二甲双胍等一线糖尿病治疗药联用无明显副作用，具有很好的应用前景^【3】。依帕列净口服吸收良好，口服1.5h后血药浓度即可达到峰值，但人体消除较慢，半衰期可达11h左右，呈现典型的快吸收慢消除过程。其现有剂型仅为口服吸收的片剂。依帕列净的不良反应发生率极低，约在4%以下，其主要不良反应为血糖控制不良引起的低血糖、过度利尿引起的血容量降低和低血压、葡萄糖含量提高引发致病菌滋生导致尿道生殖道感染等^【4】。依帕列净的口服用药现无法解决以下问题1终末期糖尿病人特别是并发心血管疾病患者用药引发尿道感染低血压等加重危重病情2对于行动不便的老年糖尿病患者依帕列净极强的利尿作用极剧增加了排尿频次大幅加剧了生活困难3用药方式较为单一使用不便，特别是对有吞咽困难的青少年糖尿病患者极为不便。对处于昏迷状态的病人现有剂型更是无法给药4虽然已报导具有良好的联合用药前景，但未发现有依帕列净与一线降血糖药的复方制剂特别是与诸如二甲双胍等口服降糖药的复方制剂。5由于依帕列净强烈作用于肾脏及其代谢与肝脏有密切联系，服用此药对肝肾功能有较高要求。现有剂型对释药速度缺乏控制可能在已有肝肾功能损伤的患者身上产生严重的副作用。

PLGA微球是一种常见的缓释药物载体，陈益明等用此将阿肽地尔的释放时间延长至一个月^【5】。PLGA水解产生的乳酸和羟基乙酸是常见生理物质故其生物相容性高。PLGA复杂的复杂网状结构可减缓药物的扩散速度，一些不良反应较强的药物可借此降低吸收速度通过削减血药浓度来减轻不良反应，同时微球长效释药可降低给药次数。患者长期吸收药物有利于血药浓度的维持，在一定程度上降低总药量提升患者对药物的依从性。另外对一些难溶的药物PLGA微球也是一个良好的载体选择，钟薇等把恩替卡韦分散在PLGA微球中实现了长效给药^【6】。本实验旨在用乳剂挥发法制备一种依帕列净PLGA缓释微球，实现该药的长期释放。并拥有以下特点1应用范围广泛，可以用于口服、注射、腔道等给药方式。对于昏迷者选用注射，吞咽困难者可冲水饮服，肠梗阻患者可通过肛门给药，缓解了特殊情况患者的用药困难。2制造方法简便，成本低。所用PLGA等材料均为常见原料，价格便宜。制作工艺简单，对于可以合用依帕列净的药物，甚至无需选用合适溶剂即可通过制成难溶粉末分散包埋在微球中。3长效释放降低了对特定人群的毒副作用，扩大依帕列净的适用人群。为降低依帕列净不良反应发生率及新剂型探索提供一条新的途径。

实验设计

乳剂挥发法是一种制备微球的常用方法。其将药物与制备材料溶解或分散于挥发性有机试剂中,在剧烈搅动中与水混合形成O/W型乳液，在随后的搅动中有机试剂逐渐挥发，制备材料从中析出药物析出沉积在制备材料中从而得到含药微球，在此基础上又发展出W/O/W、 S/O/W等多种乳剂制备微球^【7】。一批合格的PLGA 缓释微球应具有以下特征:1微球粒径分布范围较窄2目标药物的载药量或者包封率较高。3微球表面微孔分布均匀，无大面积破损结构。4微球粒径合理，药物释放稳定呈现PLGA微球典型的三相释放特征或者无一开始的突释相，整体释药周期长。一般PLGA微球的质量受有机试剂选择、PLGA种类与浓度、表面活性剂浓度、油水相比、搅拌速度等制备因素制约。一般而言所用有机试剂具有药物溶解度高、与水不互溶且挥发快、密度大高黏度的特征，以达到包被药物与水充分混合形成乳液又不使药物扩散至水相的目的。选定油水相比例和搅拌速度时应考虑到1油水比过低油状液滴无法充分分散形成O/W乳滴不稳定，油水比过高则液体体积偏大上层乳液搅拌不充分粒径过大，不符合质量要求。2搅拌速度与微球粒径有直接关系，速度慢乳液受剪切力小形成微球偏大，速度过快则易制成粒径小比表面积大的微球。药物过快扩散至水相中。选用PLGA极性应与药物相近以提高单位载药量。适当提高PLGA浓度可加快其析出速度减少制备过程中药物的损失，但过高浓度的PLGA使油相黏度过大，阻碍搅拌形成的微球粒径分布偏宽。表面活性剂的选用应使乳滴可以稳定存在为目标，浓度偏小时油水界面不稳定乳滴之间易融合成大液滴所得微球粒径较大。浓度过大时，表面活性剂为使油水界面表面张力降低尽可能形成小乳滴，但比表面积过大药物损失严重^【8】。现有研究表明，依帕列净微溶于N,N-二甲酰胺、甲醇等溶液中^[9]，综合考虑溶剂毒性后选择直接将依帕列净分散于二氯甲烷制成混悬液作为油相。本实验以药载比、PLGA 浓度、表面活性剂(PVA)浓度、油水相体积比为影响因素探索制得依帕列净的最佳条件。试验的正交设计表格如下。选用1ml二氯甲烷作为油相所需药品如下表所示。

实验过程

1精密称取所需依帕列净，转入1ml溶有PLGA的二氯甲烷中，超声波处分散30S，再用漩涡振荡器震荡1min形成均匀的混悬液。

2事先配置好所需PVA水溶液，体积为油水相比的三倍。用注射器吸取油相混悬液，缓慢加入到符合油水比的水相中。磁力搅拌器1000rpm搅拌5min形成O/W初乳，放慢速度至800rpm搅拌30min加入剩余水相放慢搅拌速度至300rpm,搅拌3h。蒸干二氯甲烷后，将混合相倒入离心机2500rpm离心10min弃上清液。用双蒸水离心洗涤三次,放入真空干燥箱中干燥得到微球。

微球的质量分析

1形态观察，通过高倍率光学显微镜进行。理想的微球大小基本一致，表面孔洞分布均匀。

2粒径 动态光散射粒度仪或其他粒度仪

3载药量包封率

载药量=依帕列净重量/微球重量 包封率=实际载药量/理论载药量

现有对依帕列净的含量测定，多选用高效液相色谱或荧光分光测定的。Maha F. Abdel‐Ghany等研究发现，高效液相色谱可以有效分开依帕列净及降解产物，甲醇是依帕列净的良好溶剂，其余常见的有机缓冲体系均会一定程度降低依帕列净的信号强度^[10]。为防止微球成分吸收峰干扰依帕列净检测此处选用色谱。色谱条件C18柱 紫外检测波长225nm。流动相磷酸二氢钾-乙腈（50:50,v/v）缓冲液，流速1ml/min。或流动相2%冰醋酸（三乙胺调pH至4.0）-甲醇混合相(45:55,v/v)，紫外检测波长245nm。

专属性考察：称取10mg空白微球溶于1ml二氯甲烷中超声波分散1min。加入25ml容量瓶中。加5ml甲醇分散。再用流动相定容。移液管移取5ml混合液于25ml容量瓶再补加流动相定容。取20ul该溶液进样。取1mg依帕列净对照品与空白微球10mg，1mg依帕列净混合物如上操作，依帕列净可以以溶于甲醇的方式加入。依帕列净与杂质信号峄的分辨率应在1.5以上。

标准曲线绘制：精密称取适量依帕列净对照品以专属性考察所述方法稀释成5、10 、15、 20 、25mu;g/ml溶液。每个浓度进样三次，取三次检测峰面积平均值与对应浓度以最小二乘法得到标准曲线及回归方程。

准确度精密度考察：称取适量依帕列净对照品与10mg空白微球以专属性考查方法配成5、10、20mu;g/ml溶液。每个浓度每天进样五次,进样三天。通过回归方程计算各自测量浓度。各浓度回收率应在85%至115%之间，日内和日间测量标准偏差应在15%以内。

载药量包封率测定：精密称取10mg所制微球，以上述方法进样测定其载药量及包封率。对9批正交试验所得样品的平均粒径、载药量、包封率进行方差分析，考察四个因素对微球质量特别是载药量影响大小。通过分析选取其中最佳条件作为依帕列净微球制备条件。

胃液肠液体外释药模拟

释放是微球种药物进入释放介质的过程，可以说是评价一个微球质量的最重要指标。所谓PLGA微球的三相释放是指药物一开始的快速突释期，中间释药速率较慢的扩散释放期以及最终释药速度再度加快的溶蚀释放期。其中包括突释期在内整个药物的扩散释放期，均是由于释放介质经孔隙进入微球内部使PLGA溶胀孔隙扩大，药物因微球与介质之间的浓度梯度从扩大空隙中向介质自发扩散形成的，一些药物或因大量分布在微球表面或因水溶性强快速扩散造成了突释期。之后的溶蚀释放期则是由于PLGA微球在释放介质中水解微球中剩余药物释放形成的。微球的释放由多种因素共同决定，如1微球自身的性质，孔径较小的微球释放介质渗入较慢药物扩散也慢。PLGA微球的极性影响药物在其中的分布，继而影响了药物能否突释。微球的粒径决定了它的比表面积，比表面积小的微球释放介质进入微球相对容易药物释放快。2释放介质的温度和pH值。温度主要影响药物和PLGA分子运动速度和释放介质的黏度一般而言温度越高，药物分子及PLGA运动越强介质黏度更低。微球骨架比平时更宽松药物释放更快，当温度上升至P LG A玻璃态温度以上时,PLGA骨架几乎成为定型的玻璃态，药物扩散受骨架的制约进一步降低。pH值是P LG A中酯键水解的重要催化因素，在过酸过碱的条件下P LG A的水解会加快，有利于药物快速释放。另pH值也可通过促进或阻碍P L G A分子间氢键的形成影响微球骨架的团聚状态来操控扩散。另外释放介质中的一些杂质分子也可通过如表面活性剂形成胶束包裹药物加大浓度梯度，金属离子加速酯键水解等方式影响释放^[11]。不同于明胶等大分子，目前尚未发现生物体内有可以促进P LG A降解的酶存在。PLGA在体内的降解仍被认为是以酸碱催化酯键水解的方式进行的。参考《中国药典（2020版)》关于释放度测定的规定。采用桨法测定依帕列净微球释放速率，考虑胃液、肠液常见的pH值（1.5及7.8）。用0.1mol/l的盐酸摸拟胃液，pH 7.8的磷酸盐缓冲液模拟肠液。设置溶出温度为37℃以及60℃分别进行人体溶出模拟和加速释放研究。每次精密称取10mg依帕列净加入释放介质中，相同温度下，每种释放介质设置三个平行实验组。采样时间设定为5、10、15 、20、30、40 、50min、1、2、3、4、5h、1、1.5、2、2.5、3d。实验过程中，根据释放的实际情况进行调整。将搅拌速率设置为80r/min。释放介质中依帕列净含量的测定参考微球载药量检测所用方法将其中用于溶解依帕列净和H P L C的甲醇和二氯甲烷替换成对应释放介质即可。将测定结果与载药量结合算出释放度，由释放度对时间作图会绘制释放曲线，重点观察微球是否存在突释现象。以及不同pH、温度下释放曲线的差异,并拟合零级、一级、Higuchi方程。

参考文献

【1】刘敏. 我国糖尿病地区分布及其疾病负担研究[D].中国疾病预防控制中心,2019

【2】刘莲,封宇飞.SGLT2抑制剂依帕列净的药理作用与临床评价[J].中国新药杂志,2015,24(11):1201-1203 1218.

【3】Kaku, Kohei; Chin, Rina; Naito,etc.Safety and effectiveness of empagliflozin in Japanese patients with type 2 diabetes: interim analysis from a post-marketing surveillance study[J].EXPERT OPINION ON DRUG SAFETY,2020,19(2):211-221.

【4】Chawla, Gita; Chaudhary, Krishna Kr.A complete review of empagliflozin: Most specific and potent SGLT2 inhibitor used for the treatment of type 2 diabetes mellitus[J].DIABETES amp; METABOLIC SYNDROME-CLINICAL RESEARCH amp; REVIEWS,2019,13(3):2001-2008.

【5】陈益明,支钦.注射用醋酸阿肽地尔缓释微球的制备及体外释药研究[J].海峡药学,2020,32(11):8-10

【6】钟薇,苏颖,李志明,王爱萍,孟庆国,梁荣财.响应面法优化恩替卡韦微球的制备及体外释药[J/OL].烟台大学学报(自然科学与工程版):1-11[2021-02-20].https://doi.org/10.13951/j.cnki.37-1213/n.200711.

【7】严丽华. 载BSA海藻酸钙微球的制备及其体外释放度研究[D].上海交通大学,2018.

【8】方毅承. 多奈哌齐-PLGA微球的制备与释药机理研究[D].浙江工业大学,2019.

【9】Ma Jiayuan; Huang Xin; Wang,etc.Solubility and thermodynamic mixing and dissolution properties of empagliflozin in pure and binary solvent systems[J].JOURNAL OF MOLECULAR LIQUIDS,2020,309(113004)

【10】Abdel-Ghany, Maha F.; Ayad, Miriam F.; etc.Liquid chromatographic and spectrofluorimetric assays of empagliflozin: Applied to degradation kinetic study and content uniformity testing[J].LUMINESCENCE,2018,23(5):919-932.

【11】王珊,花亚冰,高翔.注射用乳酸-羟基乙酸共聚物微球的体内外相关性研究进展[J].药学学报,2021,56(01):158-168

资料编号：[371217]

依帕列净PLGA缓释微球的制备与体外释放

绪论

糖尿病是一种常见的人体代谢控制障碍疾病。其以血糖升高为起点引起的一系列并发症诸如尿糖、肥胖、脂质代谢障碍、酸中毒，并可能合并高血压心脏病等顽固性疾病极大地降低了患者的生活质量。随着生活水平的提高我国的糖尿病发病率数十年来逐步上升，至2013年以突破10%，现存糖尿病患者已达1.1亿以上，成为全球糖尿病患者最多的国家。并呈现出发病年龄年轻化、病情知晓率低治疗率低、患者预期寿命延长、防治水平地域差异大等特征^【1】。糖尿病病程的长期性要求患者必须常年服用降糖药物，我国庞大的患病群体提供了糖尿病药物巨大的市场空间，同时也急迫要求提高药物的研发生产水平。根据发病原因糖尿病可分为Ⅰ型和Ⅱ型，Ⅰ型患者胰岛功能先天障碍，在青少年时期便发病。Ⅱ型患者多因后天因素导致胰岛功能水平下降或机体对胰岛素不敏感，是现存糖尿病患者的主力。现有科技水平无法治愈糖尿病，治疗以补充胰岛素（胰岛素及类似物）或促其分泌（磺脲类药）、提高组织细胞血糖利用率（二甲双胍等），降低葡萄糖胃肠吸收（阿卡波糖）为主。这些药物仍有过度依赖胰岛素相关途径、胃肠反应较大（阿卡波糖）、药物合用禁忌多等诸多不足之处。

肾脏是人体吸收葡萄糖排泄的最主要途径。健康人群在不过量摄取葡萄糖的情况下，血糖会被肾小球滤过形成原尿，再重新被肾小管全部吸收，最终尿液中不含葡萄糖。肾小管对葡萄糖重吸收的部位几乎全部集中在近曲小管。该过程主要由肾小管管腔细胞上的钠葡萄糖共转运蛋白(SGLT)驱动。管腔细胞钠钾泵泵出细胞内Na ，原尿与管腔胞浆间形成Na 浓度差，钠葡萄糖共转运蛋白借助这种浓度差顺梯度转运Na ，并利用化学梯度力同时转运葡萄糖。钠葡萄糖共转运蛋白(SGLT)有多种(SGLT1和SGLT2等)，其中S G L T2是近曲小管转运葡萄糖的主力，其吸收葡萄糖占重吸收总量的90%左右。因而SGLT2蛋白抑制剂是一条治疗Ⅱ型糖尿病的新途径，通过抑制葡萄糖重吸收提高其排泄量，既可以在短时间内降低血糖浓度。又可降低血液中Na 浓度从而解除血管内皮细胞紧张性降低血压。对于常见的糖尿病并发症如心力衰竭、高血压等均有一定的缓解作用。同时这种抑制剂直接作用于肾小管与胰岛素效应无关，对于普遍有胰岛素抵抗的Ⅱ型糖尿病患者来说理论上均有疗效。依帕列净（empagliflozin）是勃林格殷格翰制药公司和礼来公司联合开发的一种新型SGLT2抑制剂。现已被F D A批准与利拉利汀用于Ⅱ型糖尿病的联合治疗^【2】。临床实验显示其具有良好的降血糖、降血压、控制糖尿病人体重的疗效。与胰岛素、二甲双胍等一线糖尿病治疗药联用无明显副作用，具有很好的应用前景^【3】。依帕列净口服吸收良好，口服1.5h后血药浓度即可达到峰值，但人体消除较慢，半衰期可达11h左右，呈现典型的快吸收慢消除过程。其现有剂型仅为口服吸收的片剂。依帕列净的不良反应发生率极低，约在4%以下，其主要不良反应为血糖控制不良引起的低血糖、过度利尿引起的血容量降低和低血压、葡萄糖含量提高引发致病菌滋生导致尿道生殖道感染等^【4】。依帕列净的口服用药现无法解决以下问题1终末期糖尿病人特别是并发心血管疾病患者用药引发尿道感染低血压等加重危重病情2对于行动不便的老年糖尿病患者依帕列净极强的利尿作用极剧增加了排尿频次大幅加剧了生活困难3用药方式较为单一使用不便，特别是对有吞咽困难的青少年糖尿病患者极为不便。对处于昏迷状态的病人现有剂型更是无法给药4虽然已报导具有良好的联合用药前景，但未发现有依帕列净与一线降血糖药的复方制剂特别是与诸如二甲双胍等口服降糖药的复方制剂。5由于依帕列净强烈作用于肾脏及其代谢与肝脏有密切联系，服用此药对肝肾功能有较高要求。现有剂型对释药速度缺乏控制可能在已有肝肾功能损伤的患者身上产生严重的副作用。

PLGA微球是一种常见的缓释药物载体，陈益明等用此将阿肽地尔的释放时间延长至一个月^【5】。PLGA水解产生的乳酸和羟基乙酸是常见生理物质故其生物相容性高。PLGA复杂的复杂网状结构可减缓药物的扩散速度，一些不良反应较强的药物可借此降低吸收速度通过削减血药浓度来减轻不良反应，同时微球长效释药可降低给药次数。患者长期吸收药物有利于血药浓度的维持，在一定程度上降低总药量提升患者对药物的依从性。另外对一些难溶的药物PLGA微球也是一个良好的载体选择，钟薇等把恩替卡韦分散在PLGA微球中实现了长效给药^【6】。本实验旨在用乳剂挥发法制备一种依帕列净PLGA缓释微球，实现该药的长期释放。并拥有以下特点1应用范围广泛，可以用于口服、注射、腔道等给药方式。对于昏迷者选用注射，吞咽困难者可冲水饮服，肠梗阻患者可通过肛门给药，缓解了特殊情况患者的用药困难。2制造方法简便，成本低。所用PLGA等材料均为常见原料，价格便宜。制作工艺简单，对于可以合用依帕列净的药物，甚至无需选用合适溶剂即可通过制成难溶粉末分散包埋在微球中。3长效释放降低了对特定人群的毒副作用，扩大依帕列净的适用人群。为降低依帕列净不良反应发生率及新剂型探索提供一条新的途径。

实验设计

乳剂挥发法是一种制备微球的常用方法。其将药物与制备材料溶解或分散于挥发性有机试剂中,在剧烈搅动中与水混合形成O/W型乳液，在随后的搅动中有机试剂逐渐挥发，制备材料从中析出药物析出沉积在制备材料中从而得到含药微球，在此基础上又发展出W/O/W、 S/O/W等多种乳剂制备微球^【7】。一批合格的PLGA 缓释微球应具有以下特征:1微球粒径分布范围较窄2目标药物的载药量或者包封率较高。3微球表面微孔分布均匀，无大面积破损结构。4微球粒径合理，药物释放稳定呈现PLGA微球典型的三相释放特征或者无一开始的突释相，整体释药周期长。一般PLGA微球的质量受有机试剂选择、PLGA种类与浓度、表面活性剂浓度、油水相比、搅拌速度等制备因素制约。一般而言所用有机试剂具有药物溶解度高、与水不互溶且挥发快、密度大高黏度的特征，以达到包被药物与水充分混合形成乳液又不使药物扩散至水相的目的。选定油水相比例和搅拌速度时应考虑到1油水比过低油状液滴无法充分分散形成O/W乳滴不稳定，油水比过高则液体体积偏大上层乳液搅拌不充分粒径过大，不符合质量要求。2搅拌速度与微球粒径有直接关系，速度慢乳液受剪切力小形成微球偏大，速度过快则易制成粒径小比表面积大的微球。药物过快扩散至水相中。选用PLGA极性应与药物相近以提高单位载药量。适当提高PLGA浓度可加快其析出速度减少制备过程中药物的损失，但过高浓度的PLGA使油相黏度过大，阻碍搅拌形成的微球粒径分布偏宽。表面活性剂的选用应使乳滴可以稳定存在为目标，浓度偏小时油水界面不稳定乳滴之间易融合成大液滴所得微球粒径较大。浓度过大时，表面活性剂为使油水界面表面张力降低尽可能形成小乳滴，但比表面积过大药物损失严重^【8】。现有研究表明，依帕列净微溶于N,N-二甲酰胺、甲醇等溶液中^[9]，综合考虑溶剂毒性后选择直接将依帕列净分散于二氯甲烷制成混悬液作为油相。本实验以药载比、PLGA 浓度、表面活性剂(PVA)浓度、油水相体积比为影响因素探索制得依帕列净的最佳条件。试验的正交设计表格如下。选用1ml二氯甲烷作为油相所需药品如下表所示。