5-（氯噻吩）-2-羧酸中杂质2-氯噻吩-3-羧酸的检测方法开发与验证文献综述

开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）

1. 拟研究问题

国内对利伐沙班检测大多采用国家进口注册标准方法，该方法对利伐沙班已知的8种杂质中的两种进行了控制，其它六种均未进行控制，5-氯噻吩-2-羧酸是其中一种。

5-氯噻吩-2-羧酸作为利伐沙班的起始原料和降解产物，目前尚无其质量研究方面的报道。经实际验证，使用现有检测方法测定5-氯噻吩-2-羧酸时存在保留时间短、分离度差、峰形不佳、重现性不好、基线干扰等问题。^[1]根据工艺，5-氯噻吩-2-羧酸的合成中可能引入的杂质是2-氯噻吩-3-羧酸。为有效控制5-氯噻吩-2-羧酸中有关物质，参照药品杂质分析指导原则，控制其杂质限度为0.10%。本实验采用高效液相色谱法测定5-氯噻吩-2-羧酸中杂质2-氯噻吩-3-羧酸含量，该方法精密度高，测定结果准确可靠，重现性好，可量化，能有效解决上述问题，更好地监控5-氯噻吩-2-羧酸的质量。并通过方法学验证证明该方法可为利伐沙班的质量研究提供参考。

1. 研究手段及原理

本课题主要采用高效液相色谱法对5-氯噻吩-2-羧酸中杂质2-氯噻吩-3-羧酸进行检测。色谱柱为：Phenomenex Luna C18 100A，250mmtimes;4.6mm，5micro;m。该色谱柱通过键合技术和端基封尾，消除暴露的硅醇基团，尖锐的峰型提供非常高的灵敏度。pH3.0:结合待测物质的结构性质，流动相pH调为弱酸性，改变色谱峰保留行为，分离度更好。调整梯度洗脱起始有机相比例及洗脱程序，延长待测物质与固定相的相互作用时间。检测器为紫外检测器：灵敏度高、噪声低；为选择性检测器；对温度和流动相流量波动不敏感，可用于梯度洗脱。

1. 文献综述

5-氯噻吩-2-羧酸（简称：LF-SM3）为类白色固体粉末，应用于禽畜消炎抗菌药，主要用于治疗鸡、兔、羊球虫病（盲肠球虫），鸡霍乱及伤寒病；作为有机合成中间体和医药中间体，5-氯噻吩-2-羧酸是实验室研发和化工医药合成过程中为预防静脉血栓形成(VTE)的抗凝血药利伐沙班的中间体。

利伐沙班主要用途为各类血栓性疾病的预防治疗，尤其是髋关节和膝关节置换手术患者在术后对肺栓塞和深静脉血栓的预防治疗。^[2]可延长血浆凝血酶原时间（PT），和活化部分凝血活酶时间（APTT），^[3]具有高度的选择性和竞争性。利伐沙班的抗凝作用可预测性好，无需进行常规凝血监测。^[4]随着人们对新一代抗凝药物利伐沙班的探究，其中间体的研究也受到广泛关注。

杂环化合物的制备技术领域公开了一种5-氯噻吩-2-羧酸的制备方法：工业上以5-氯-2-乙酰基噻吩为原料，用丙酮溶解，在0～10℃下向反应中滴入磷酸二氢钾的水溶液，再滴加亚氯酸钠的水溶液，20～30℃下，氧化得到5-氯噻吩-2-羧酸。^[5]该方法操作条件温和，效率高，无污染。

2-氯噻吩-3-羧酸为5-氯噻吩-2-羧酸原料药中的杂质，按照中华人民共和国药典2020年版四部lt;9102gt;“药品杂质分析指导原则”以及ICH指导原则，2-氯噻吩-3-羧酸属于新原料药中的杂质。在合成所涉及的化学反应、原料药引入的杂质及可能降解产物进行合理科学的评估基础上，2-氯噻吩-3-羧酸属于化学条件以及相关条件下可能会产生的杂质。药物中杂质的存在，不仅影响药物的药理活性，更是患者出现不良反应的主要因素。^[6]对药物中杂质的分析可加速药物的研究成果，是科学人员进行药物研发过程中的关键操作。杂质的分离目的是获取杂质单一组分进行单独检测。对有机物的分离、提纯方式，依据水溶性、互溶性酸碱性等性质，可通过蒸馏、重结晶、萃取的方式实现。或用色谱法，利用吸附剂对不同有机物吸附作用的不同从而分离纯化。^[7]作为医药杂质检验最基本的方式，高效液相技术在杂质分离中仍有突出作用。

采用高效液相色谱法进行5-氯噻吩-2-羧酸中有关物质限度检查时，用于杂质检测和定量测定的分析方法须按照中华人民共和国药典2020版分析方法验证指导原则lt;9102gt;和ICH指导原则进行验证。受色谱参数设置值的影响较大，^[8]考虑理论塔板数和分离度，确定实验条件，确定分析检测方法；并完成方法学验证，包括专属性试验、定量限、检测限、线性和范围、精密度、准确度，以及方法耐用性。

本实验的目的是建立了5-氯噻吩-2-羧酸的反相高效液相色谱法中2-氯噻吩-3-羧酸有关物质的测定方法开发以及验证，为5-氯噻吩-2-羧酸的进一步研究提供了可靠的分析方法及理论依据。对药品质量安全有众大意义，有助于利伐沙班替代传统的抗凝药物，从而成为首选药物。