开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)
[拟研究或解决的问题]
- 完成丹参酮的制备;
- 建立1型糖尿病肾病小鼠动物模型;
- 考察丹参酮对糖尿病肾病小鼠的保护作用;
- 探索丹参酮发挥保护作用的相关作用机制。
[采用的研究手段及方法]
- 材料
1.1 实验动物:50只7周龄,雄性,C57BL/6小鼠,购自扬州大学,体重20plusmn;2g。标准化饲养房笼子喂养,并饲以标准颗粒饲料,自由饮水,室温23℃-28℃,相对湿度50%-80%,适应性饲养一周,每日更换垫料。
1.2 细胞:鼠肾小球系膜细胞
1.3 试剂:乙酸乙酯、链脲佐菌素(STZ)、0.1mol/L柠檬酸缓冲液、肝素、生理盐水、肌酐(Cr)测试盒、尿素氮测试盒、总胆固醇测试盒、甘油三酯测试盒、血清高密度脂蛋白胆固醇测试盒、血清低密度脂蛋白胆固醇测试盒、微量白蛋白测试盒、尿蛋白定量测试盒、RIPA(强)裂解液、脱脂牛奶、TBS/T洗脱液、ECL化学发光曝光液、吐温20、DMSO、过硫酸铵、浓盐酸、甲醇、胎牛血清、兔抗HO1抗体、羊抗Keap1抗体、羊抗NQO1抗体、兔抗Nrf2抗体,兔抗GAPDH抗体、Rabbit Anti-Goat IgG/HRP、Goat Anti-Rabbit IgG/HRP、PBS、TRIzol液、氯仿、异丙醇、乙醇。
1.4 仪器:低温高速离心机、电子分析天平、-20℃低温冰箱、-80℃低温冰箱、高压灭菌锅、匀浆机、磁力搅拌器、超净工作台、回流提取装置、Bio-Rad酶标仪、垂直板电泳槽、电泳仪、水平摇床、半干电转移、Bio-Rad凝胶成像系统。
2、方法
2.1 丹参酮的制备:称取150 g丹参粉末,放入具塞锥形瓶,加入1200 mL乙酸乙酯超声提取2 h。将提取所得上清抽滤得滤液和滤渣,合并滤液,50℃下旋转蒸发浓缩,再经冷冻干燥,制备得到提取物冻干粉。。
2.2 动物的分组:小鼠随机分为空白组、模型组、丹参酮低剂量组、丹参酮中剂量组、丹参酮高剂量组,每组10只。
