拟研究的问题：Blebbistatin（Ble)，是所有Ⅱ型肌球蛋白的抑制剂，也是在研究 NMHCⅡA 功能时最常用的抑制剂，其特异性具有相对性。同时已经证实， NMHCⅡA 的基因突变与巨血小板减少症等遗传性疾病密切相关，作为一种马达蛋白， NMHCⅡA可调节细胞的运动，还参与血小板的形成，炎症中白细胞的迁移，是引起血栓形成乃至心血管疾病的关键蛋白；同时还参与肿瘤转移肾功能调节 视网膜变性等多种病理生理过程。课题组提出NMHC IIA的抑制剂可能会对缺血再灌注型脑损伤起到保护作用的假设。本课题拟考察Ble对缺血再灌注小鼠脑损伤的保护作用及其可能机制，为课题组后期探讨 NMHCⅡA在脑中风中的分子机制提供实验基础。
采用的研究手段：本实验拟采用大脑中动脉结扎1小时,再灌注24小时诱导的小鼠脑缺血再灌注损伤模型，考察手术后预先给Ble对脑梗塞面积、脑血流及神经行为学评分，脑含水量等指标的影响及其可能的机制。
- 采用HE染色评价脑损伤程度
在脑缺血1小时再灌注24小时后取脑，灌流取材后做冰冻切片，用HE染色法观察梗死区各给药组与模型组之间的差异，从而评价药物对缺血性脑损伤的改善程度。
- 采用伊文思蓝染色法评价药物对脑缺血再灌注后血脑屏障通透性的改善作用
在缺血1小时再灌22小时后，各组小鼠尾静脉均注射相同量的伊文思蓝染液，2小时后取脑观察各组小鼠大脑伊文思蓝染色情况及检测伊文思蓝在各组小鼠脑内的渗透量。
- 采用TTC染色技术测定脑梗死体积
在脑缺血1小时再灌注24小时后取脑，取材后冰冻制作切片。用2% TTC染色，根据染色后各组小鼠脑梗死体积对比评价药物对缺血性脑损伤的改善作用。
- 测定脑血流量，并进行神经行为学评分
小鼠缺血1h，再灌注24h后，运用激光多普勒血流仪测定脑血流量并进行神经行为学评分，对比各组小鼠的脑血流量及行为学评分。
(五) 测定脑含水量利用脑水肿程度评估药效
小鼠断颈处死，取脑，称湿重后于干燥烘箱中，105℃烘24 h以上至恒重，称干重，按公式计算脑含水量(%)=[湿重-干重]/ 湿重*100%。
（六）蛋白印迹技术测定脑组织各组紧密连接蛋白的表达情况
在脑缺血1小时再灌注24小时后取脑提蛋白，用Western blot技术考察脑组织中各组紧密连接蛋白ZO-1，occludin，claudin-5等蛋白的表达情况。
