题目：LC-MS/MS法测定生物样品中FCN-411的浓度
1. 研究或拟解决的问题
非小细胞型肺癌包括鳞状细胞癌（鳞癌）、腺癌、大细胞癌，与小细胞癌相比其癌细胞生长分裂较慢,扩散转移相对较晚。非小细胞肺癌约占所有肺癌的80%，约75%的患者发现时已处于中晚期，化疗是肺癌的主要治疗方法，90%以上的肺癌需要接受化疗治疗[1]。
阿法替尼（Afatinib），是一种创新的抗癌标靶治疗药物，适用于非小细胞肺癌HER2阳性的晚期乳腺癌患者，不可逆转地结合ErbB家族（包含四种不同的癌细胞表皮生长因子受体，如 EGFR、HER2、 ErbB3 及 ErbB4）的抗癌标靶药，进而更有效地及针对性地阻断引发癌细胞生长的讯号，减少或延缓癌细胞的增生。阿法替尼已在美国、欧洲和台湾多国家地区获批用作为一线治疗药物[2] ，应用于具有表皮生长因子受体（EGFR）突变癌细胞的非小细胞肺癌（NSCLC）治疗，是每日一次的口服标靶治疗药物。FCN-411为阿法替尼的结构类似物。
在研究FCN411在体内的药代动力学特征的过程中，应对FCN411及其代谢产物在生物样品中的浓度进行测定。
2.研究进展
由于FCN-411和阿法替尼在结构上的相似性，对于FCN-411进行定量时的方法可以参考阿法替尼的定量测定方法。关于阿法替尼的定量测定方法已有文献报道，霍秀颖等采用反相高效液相色谱法紫外检测器在254nm处对阿法替尼片中阿法替尼含量进行了定量[3]，但对于本实验中生物样品中药物含量的测定，其方法9~12ug的灵敏度远远无法达到检测的要求，故需要更灵敏，选择性更好的方法进行实验。而液相色谱串联质谱法方法（LC-MS/MS）由于在灵敏度、特异性、分析速度等方面的优势，在生物分析中的应用越来越广泛。
Stofer等人采用液相色谱串联质谱法方法（LC-MS/MS）对尿中和血浆中的阿法替尼进行定量分析[4]，用SPE萃取后进样到C18反相色谱柱的液相色谱中，内标为6-氘代阿法替尼，采用梯度洗脱将阿法替尼洗脱后进入ESI离子源的质谱定量，在血浆中，阿法替尼的定量下限为0.1ng/ml,在尿中的LLOQ为0.5ng/ml。1-甲基化14C咖啡因做内标，液体闪烁计数法对全血中，血浆，尿，粪中阿法替尼的放射性强度。方法均具备足够的准确度，精密度和专属性。代谢物由离线放射性检测串联液相色谱在检测。Wind等亦采用HPLC-MS/MS法在阿法替尼药动学实验中血浆样品中的afatinib含量进行测定[5]。故LC-MS/MS 法为生物样品中药物含量测定的趋势和方向。
