开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
一、课题背景
家族性高胆固醇血症（FH）又称家族性高beta;脂蛋白血症。临床特点是高胆固醇血症、特征性黄色瘤、早发心血管疾病家族史。FH是儿童期最常见的遗传性高脂血症，也是脂质代谢疾病中最严重的一种，可导致各种危及生命的心血管疾病并发症出现，是冠状动脉疾病的一种重要危险因素。家族性高胆固醇血症患者中并发冠心病的比例明显增高、发病早、程度重，预后差；此外还有主动脉（降主动脉、颈动脉等）广泛粥样硬化；冠状动脉瘤样扩张等。
依折麦布是第一个也是惟一个批准用于临床的选择性胆固醇吸收抑制剂 ，1987年他汀诞生以来第一种全新机制的降胆固醇药物。依折麦布能选择性抑制小肠胆固醇转运蛋白，有效减少肠道内胆固醇吸收，降低血浆胆固醇水平以及肝脏胆固醇储量。依折麦布联合中低强度他汀，可以同时抑制胆固醇的吸收和合成，两种机制互补协同增效，降LDL－C幅度即达50%以上，为临床强化降脂治疗提供了一个新型的选择；并且联合用药的安全性和耐受性与他汀单药治疗相当。《2015降胆固醇药物联合应用中国专家建议》指出，基于IMPROVE-IT、SHARP研究和降胆固醇治疗协作组荟萃分析的结果，ASCVD患者可考虑初始联合依折麦布10mg与常规剂量他汀降胆固醇治疗，从而使如PCI术后患者、冠心病合并糖尿病等极高危患者LDL-C达标，并长期坚持治疗。对于单独应用他汀类药物胆固醇水平不能达标或不能耐受较大剂量他汀治疗的患者，也可以选择依折麦布和中低剂量他汀的联合治疗。
依折麦布是一种新型胆固醇吸收抑制剂，与小肠黏膜刷状缘膜小囊泡上的膜蛋白具有极高的亲和力，选择性地抑制肠道胆固醇及相关谷甾醇的吸收，使到达肝脏的胆固醇减少，降低肝脏中的胆固醇，同时增加血液中的胆固醇的清除率。高胆固醇血症患者经依折麦布单药治疗后，低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）可中度降低（少于20%）。由于依折麦布对内源性胆固醇无抑制作用，而他汀类药物的作用机制为减少肝脏中胆固醇的合成，故两药联用有协同降低胆固醇的作用，在降低高胆固醇血症患者的总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、载脂蛋白B（apoB）和三酰甘油（TG）及提高高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）等方面均优于两种药物单独应用时。此外，依折麦布不增加胆汁分泌，对小肠吸收三酰甘油、脂肪酸、胆汁酸及脂溶性维生素均无显著影响。
液相色谱-质谱（LC-MS）联用技术自Horning等于70年代进行开创性研究工作以来，经过20多年的发展已趋向成熟，应用日益广泛。它以LC为分离手段，MS为检测手段，集LC的高分分离能力与MS的高灵敏度、高专属性于一体，已成为药物杂质检查、体内药物代谢、代谢产物的药物代谢动力学研究和结构研究等现代药学前沿领域中最强有力的分析工具之一。应用LC-MS连用技术可获得复杂混合物中单一成分的质谱图，大大有利于药物杂质、药物代谢和内源性化合物的分离和鉴定，尤其适用于对血浆样品中的药物浓度进行定量和定性分析。相对LC-MS，液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）也是痕量分析领域中的一种最有效的分析技术，它有二级以上的质量分析器串联组成，也是将分离和鉴定融为一体的分析方法，特别适合痕量组分的分离和结构鉴定。在这种多级质量分析模式下，LC-MS/MS的优势有：
- LC-MS/MS有更好的专属性，选择性和灵敏度。
- LC-MS/MS对样品的纯度要求低，可适当的简化样品前处理的程序，缩短分析时间。
- LC-MS/MS的定性功能更加完善，不经可以得到代谢物的质谱图，还可以得到其裂解产物的质谱图，而且通过操作模式的改变可以进行化合物的归属及结构研究。
因此，可以使用LC-MS/MS法较为精确的测定人体血浆中依折麦布的浓度，并将该方法应用至依折麦布片人体药代动力学的研究。
- 要解决的问题
- 建立专属性强、灵敏度高的液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS)的测定人血浆中依折麦布的浓度。
- 应用该方法至依折麦布片人体药代动力学的研究。
- 可行性分析
- LC-MS/MS拥有较好的专属性，选择性和灵敏度；在对人体血浆中的药物检测时，该方法对样品的纯度要求低，可适当的简化样品前处理的程序，缩短分析时间。
- 所在实验室已成功对多种药物进行检测，可提供检测仪器和实验环境。
- 指导老师舒畅老师在色谱分析领域有深入的研究。
- 研究方法和内容
- 查阅文献，熟悉掌握依折麦布的结构及其理化性质。
- 初步对依折麦布的标准溶液进行LC-MS/MS检测
- 优化各项检测条件和参数
- 建立和优化LC-MS/MS定量分析人体血浆内依折麦布的浓度
建立和优化方法时采用的实验步骤概括如下[9]：
- .Q1扫描确定母离子的质荷比 根据依折麦布的性质，选择分析的极性（ 或-）、离子化方式（ESI或APCI）,根据分子量选择扫面范围和时间，确定母离子的质荷比，准确到小数点后一位。
- .子离子扫描确定子离子的质荷比 获得高质量的二级质谱图，以母离子的强度为MS图谱中峰强度的1/3到1/4为宜，平滑后选择子离子质荷比，准确到小数点后一位。
- .优化依折麦布参数 根据前面选出的母、子离子，组建MRM离子对；选择多个离子对时，应合理分配每一对的分析时间；用“Ramp”，优化Compound项下各参数，以及Source项下CAD参数。各离子对应分别设定；初步建立MRM方法；一般优化两次，已得到比较准确的结果。
- .优化离子源参数。
- 优化色谱条件 接色谱柱，用适当浓度样品考察分离情况，MRM方式可以不必所有峰都基线分离，但要注意避开介质离子抑制的干扰；调整色谱流动相组成和流速，并相应调整源参数。
- 工作计划
2月28日—3月17日：完成文献查阅、开题报告等前期工作。
3月18日—5月10日：完成方法建立、条件优化和数据处理等工作。
