一、研究背景
近年来，肿瘤免疫治疗是癌症领域的热点，也是当下肿瘤治疗领域最具前景的发展方向之一，在复发、难治性肿瘤的治疗上表现出了突破性疗效。肿瘤免疫治疗是通过调动机体的免疫系统，增强抗肿瘤免疫力，从而抑制和杀伤肿瘤细胞。众所周知，T细胞是抗肿瘤免疫的核心执行者[1]。T细胞的活化不但需要由抗原提呈细胞提供的第一信号的刺激,同时还需要协同刺激分子提供的第二信号的刺激。协同刺激分子不但提供增强免疫的共刺激信号，而且还提供抑制免疫的共抑制信号，以此达到调节免疫的作用，这些免疫抑制信号即为免疫检查点。在肿瘤的发生、发展中，免疫检查点成为免疫耐受的主要原因之一，应用免疫检查点抑制剂，可以解除肿瘤患者的免疫抑制, 发挥T细胞抗肿瘤作用，达到治疗肿瘤的目的。如今，针对免疫检查点的癌症免疫治疗研究发展迅速，将成为未来抗肿瘤研究的方向[2-3]。其中，针对免疫检查点蛋白CTLA-4、PD-1和PD-L1的抗体已成为治疗癌症的突破性疗法。然而，目前的靶点仍不足以满足临床的需求，我们需要提供更多的免疫检查点作为治疗靶点。
VISTA( V－domain Ig suppressor of T cell activation)，即T细胞激活抑制物免疫球蛋白可变区结构域，是2011年新发现的共抑制分子，是B7 /CD28家族的最新成员之一。该蛋白是典型的 I 型跨膜蛋白，具有免疫调节和免疫抑制的功能[4]，在维持外周免疫耐受和调节机体免疫应答中发挥重要的作用，被证实参与自身免疫疾病、外源病原体侵袭及癌症的发生发展过程[5-6]，有望成为免疫治疗的新靶点。
VISTA，又被称为C10orf54、PD－1H (programmed death-1 homolog)、B7-H5[7]、DD1alpha;[8]，Gi24，Dies1和SISP1[9]，其Ig V域与B7家族成员有同源性，因此，VISTA 也被归为B7家族。鼠VISTA是一种I型跨膜蛋白，有一个Ig V结构域，与B7家族具有序列同源性，具有Ig V稳定性的保守区段,VISTA是B7成员中最保守的。而人VISTA与鼠VISTA有90%以上的相似性，因此现有的VISTA相关实验常以小鼠为实验对象。人的VISTA由311个氨基酸组成，其中33个构成信号肽，130个构成胞外Ig V结构域，33个构成茎区，20个构成跨膜结构域，130个构成细胞质长尾[10]。
VISTA在人体内的表达情况与在小鼠内的表达情况非常相似，主要在造血组织或含有大量浸润性白细胞的组织中表达[11]，在B细胞上无表达。此外，VISTA 在胎盘组织中的表达水平特别高，可能与母体对胎儿组织耐受机制有关。VISTA主要表达于造血细胞，在骨髓细胞上表达非常高，在抗原递呈细胞（APCs）如巨噬细胞、树突状细胞及单核细胞等较高表达，在幼稚T细胞上也有表达，表明VISTA在更早阶段就抑制T细胞活性，与PD-1/PD-L1和CTLA-4相比，VISTA可能在不同阶段限制T细胞免疫[9]。
目前，已经证明VISTA同时发挥配体和受体功能。首先，VISTA作为配体来负向调节T细胞活化。肿瘤细胞、肿瘤炎性浸润细胞、抗原呈递细胞上表达的VISTA作为配体与幼稚T细胞上的表面受体结合，可诱导幼稚T细胞转化为调节性T细胞，抑制其IL-2和IFN-gamma;的分泌，同时阻止其活化为成熟T细胞，从而抑制免疫反应。抗原呈递细胞上表达的VISTA还可通过抑制CD69、CD25、CD44和CD62L分子的活性，进而抑制幼稚T细胞的活化。此外，髓系来源的抑制细胞（MDSCs）上表达的VISTA可抑制B细胞介导的免疫反应。同时，VISTA还可负向调控树突细胞介导的炎症反应。其次，VISTA已经被证明作为T细胞上的受体负调节其活性。VISTA-/- CD4 T细胞对多克隆和抗原特异性刺激反应大大高于野生型（WT） CD4 T细胞，导致IFN-gamma;、TNF-alpha;和IL-17A表达增加[12]。除了T细胞，VISTA还作为骨髓细胞上的受体发挥其抑制性功能。
VISTA 在多种肿瘤中均有异常表达，这提示VISTA与肿瘤有一定的相关性。已有研究表明VISTA是对PD -1抗体耐药的黑色素瘤患者的重要潜在治疗靶点[13]；类似的，VISTA已被证明是Ipilimumab药物作用于前列腺癌阻断CTLA -4通路后，起代偿作用的一条抑制性通路[14]；另外，VISTA有着不同于已知免疫检查点的表达模式和作用机制。这些研究共同提示了一种可能性——VISTA通路可能是引起PD-1抗体和CTLA-4抗体耐药的重要机制之一[15]。
VISTA在炎症调控中也扮演了重要的角色，对T细胞、B细胞等都存在调节作用，但在各个不同的疾病模型中VISTA的调控对象、作用机制不尽相同，作用效果也不一致，甚至存在截然相反的结果。
近年来，关于VISTA的研究已逐渐深入，但对于VISTA的一些作用机制仍不甚清楚。因此，对VISTA的结构和功能等方面进行基础研究是非常有必要而有意义的，可为进一步研究VISTA的免疫学功能奠定基础。
近年来，随着对蛋白质结构以及功能的研究进一步深入，重组蛋白技术的应用范围也越来越广泛。大肠杆菌是第一个用于重组蛋白生产的宿主菌，它不仅具有遗传背景清楚、培养操作简单、转化和转导效率高、生长繁殖快、成本低廉、可以快速大规模地生产目的蛋白等优点，而且其表达外源基因产物的水平远高于其它基因表达系统，表达的目的蛋白量甚至能超过细菌总蛋白量的30％因此大肠杆菌是目前应用最广泛的蛋白质表达系统。因此，利用大肠杆菌表达系统获取大量的VISTA 蛋白，有助于进一步研究免疫检查点VISTA对T细胞活化抑制及在免疫相关疾病中的作用机制。
