开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
一、实验背景
癌症的化学药物治疗是癌症治疗的主要途径之一，然而许多化学药物具有较大的毒副作用。因此，药学家们极力探寻，希望能发现抗癌作用好而毒副作用较小的药物。
千层纸素A（oroxylin A）是从中药黄芩中提取的黄酮类化合物，研究人员发现了千层纸素对多种肿瘤细胞都有一定的增殖抑制作用，并且能够抑制肿瘤血管生成，抑制肿瘤转移和侵袭以及逆转肿瘤对药物的抗药性。不仅如此，千层纸素A还具有心血管和神经保护、抗炎等其他活性，说明在抗肿瘤的同时并不会影响其他组织器官功能，比传统化疗药物相比具有其独特优势，因此在抗肿瘤方面具有广泛的应用前景。然而，千层纸素的抗肿瘤机制目前还未完全阐明，有待深入研究。
非甾体抗炎药活化基因-1（NAG-1）是位于人染色体19p12.1-13.1的转化生长因子（TGF-beta;）超家族的一员，又被称为MIC-1，PDF，GDF-15等，其编码蛋白在细胞内可形成二聚体，且被相应酶切割后可分泌到细胞外，进入血液循环系统，作用于脑干区域的相应受体而发挥食欲抑制作用。另一方面，文献报道细胞内NAG-1蛋白在肿瘤发展中也具有一定作用，但相关研究发现其对肿瘤的作用具有双重性，在肿瘤初期可以起到对肿瘤细胞活性的抑制作用，在肿瘤晚期却可能会促使肿瘤的侵袭转移，甚至加重肿瘤细胞的扩散。然而近期也有报道细胞内NAG-1基因表达能够抑制肿瘤转移，这些结果一方面可能由于研究模型不同导致，也有可能由于NAG-1蛋白细胞内定位发生改变产生。例如有研究发现NAG-1蛋白细胞核转位可以抑制TGFbeta;诱导的细胞迁移。目前已经报道多种天然化合物或者药物通过能够多种途径上调不同肿瘤细胞中NAG-1基因和蛋白表达，其上调机制也有了较为清晰的认识，即由EGR-1、P53、ATF3、Sp-1等转录因子介导的转录增强以及mRNA稳定性增加等。我们前期也发现千层纸素A能够显著提高肝癌细胞中NAG-1基因mRNA和蛋白水平，，但对于是否影响该蛋白的细胞内定位和细胞外分泌仍不清楚。
由于NAG-1对肿瘤细胞作用的复杂性，以及其介导通路尚未完全明确，研究其细胞内定位有助于功能研究。
- 实验目的与意义
本实验旨在通过蛋白免疫印记（western blot）检测和细胞免疫荧光检测等方法，探索千层纸素A处理肝癌细胞后，细胞内NAG-1蛋白细胞核及线粒体定位，以及细胞外分泌情况，为千层纸素A抗肝癌作用机制研究提供新的思路。
- 研究内容
1. NAG-1蛋白细胞核定位。
2. NAG-1蛋白线粒体定位。
