口服降糖多肽OHP2稳定性的初步研究文献综述

开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）

一、课题的研究背景、意义和目的

胰高血糖素样肽-1（GLP-1） 是由人胰高血糖素基因编码，并由人体回肠和结肠分泌细胞L细胞分泌的一种脑肠肽类激素^[1]。GLP-1通过葡萄糖依赖方式作用于胰岛beta;细胞，促进胰岛素基因的转录，增加胰岛素的生物合成和分泌^[2]；刺激beta;细胞的增殖和分化，抑制beta;细胞凋亡，从而增加胰岛beta;细胞数量^[3]，抑制胰高血糖素的分泌^[4]，抑制胃排空^[5]，减少肠蠕动，降低食欲，有助于控制摄食，减轻体重，这些功能都有利于降低餐后血糖并使血糖维持在恒定水平。因此GLP-1可以被用于开发降糖药物，目前主要作为2型糖尿病药物作用的靶点^[6]。然而，要将GLP-1应用于临床也面临着问题，那就是人体自身产生的GLP-1在人体内具有生物活性的主要形式是GLP-1（7-37），极易被体内的二肽基肽酶Ⅳ（DPP-Ⅳ）降解，其血浆半衰期不足2分钟^[7]，必须持续静脉滴注或持续皮下注射才能产生疗效，这大大限制了GLP-1的临床应用。

因此想要做出临床上的成药，就必须想办法延长GLP-1受体激动剂的半衰期。所以目前上市的GLP-1受体激动剂类药物设计思路主要分两种：以GLP-1为原型进行半衰期延长改构，以Exendin-4为原型直接改造^[8]。例如由诺和诺德开发的利拉鲁肽（liraglutide，Victoza reg;）在GLP-1的第20位赖氨酸上进行脂肪酸链修饰，在不影响与GLP-1受体亲和力的情况下有效延长了其半衰期，可以达到每日注射一次的给药间隔^[9] 豪森药业自主开发的聚乙二醇洛塞那肽是在艾塞那肽的基础上进行氨基酸改造和聚乙二醇化修饰，其作用机制与艾塞那肽相似，通过PEG的修饰使洛塞那肽的代谢减慢，体内作用时间延长^[10] 但是目前市场上绝大多数GLP-1受体激动剂药物都是注射剂型，只有2019年9月获FDA批准的由诺和诺德开发的口服semaglutide（oral semaglutide，Rybelsusreg;）是口服剂型^[11]。它口服剂型的API（活性医药成分，原料药）和注射剂型的API完全一致，主要是通过添加一种叫做SNAC（8-(2-羟基苯甲酰胺基)辛酸钠）的促吸收剂的手段来达到使其可以口服吸收的目的^[12]。

实验室前期设计的口服降糖多肽分子OHP2，便是以Exendin-4分子为原型，在此基础上对肠道内主要酶类（胰蛋白酶、靡蛋白酶、弹性蛋白酶）的酶切位点氨基酸进行突变，并在此基础上保留GLP-1受体激动活性，最终获得了具有口服降糖能力的多肽分子OHP2。体内动物实验结果表明OHP2可以有效降低糖尿病模型小鼠的空腹血糖和糖化血红蛋白，改善糖耐量和胰岛素耐量，并且可以改善脂质和能量代谢、减少组织损伤等^[13]。但是药代动力学实验结果表明，直接口服OHP2生物利用度仅为1.3% 仍处于较低水平，考虑到OHP2并不耐受胃蛋白酶的降解作用，需要在肠道吸收，故需要对OHP2进行处方设计和制剂研究，此时OHP2的稳定性研究就显得尤为重要。原料药的稳定性是指其保持物理、化学、生物学和微生物学特性的能力。按照化学药品审评标准中的规定，稳定性试验分为影响因素试验、加速试验、长期试验三个部分考察。合成多肽药物药学研究技术指导原则指出加速试验和长期试验应该在影响因素试验基础上进行选择，考察项目除常规项目外，还需考察其生物活性的变化。

本课题拟针对实验室前期筛选获得的口服降糖多肽OHP2，通过高效液相色谱法和荧光素酶报告基因法对OHP2的温度稳定性、湿度稳定性、光照稳定性进行测定，确定OHP2在制剂过程中所需条件，帮助后期OHP2的处方设计和制剂筛选。

二、实验内容

1. OHP2温度稳定性考察
2. OHP2温度稳定性考察样品制备：根据压片包衣过程中可能达到的温度和持续的时间，将温度考察的时间定为24h，温度确定为60 ℃。称取10 mg的同一批次OHP2于称量瓶底部摊成 le; 5 mm厚的薄层，开口放置于60 ℃ 恒温箱中。以加入样本时间点为0时刻，于1 h、2 h、4 h、6 h、12 h、24 h分别取出供试品，观察外重。另外，称取相同量的OHP2（同一批次）作为对照。
3. 温度对OHP2结构的影响：通过高效液相方法分析不同时间高温处理下的OHP2变化，用0.01 mol/L的PBS溶解上述供试品及对照品，吸取150 mu;L经HPLC进行含量测定。上述实验在以下色谱条件下进行测定，记录色谱图：色谱柱Agilent ZORBAX 300SB-C18柱（4.6 mmtimes;150 mm，3.5 mu;m）；流动相A为含0.1% TFA的水(v/v)，流动相B为含0.1% TFA的乙腈(v/v)；流速为1.00 mL/min；柱温为30 °C；检测波长为 215 nm；上样量为100 mu;L。流动相配比如下表所示：

时间（min）	流动相A	流动相B
0.00	65.0%	35.0%
2.00	65.0%	35.0%
3.50	35.0%	65.0%
3.51	10.0%	90.0%
5.00	10.0%	90.0%
5.01	65.0%	35.0%
7.50	65.0%	35.0%

1. 温度对OHP2活性的检测：用0.25%胰酶将处于对数生长期的A11A细胞（实验室前期成功构建高表达GLP-1R和荧光素酶报告基因的工程细胞株，CHO-GLP-1R-Luc细胞）进行消化，用DMEM(HG)/F12培养基调整细胞密度为2times;10⁵个/mL，按照每孔100 mu;L的量均匀铺在96孔板中，置于37°C，5% CO₂培养箱中孵育4 h。待细胞完全贴壁后，用0.01 mol/L的PBS溶解上述供试品及对照品，将过滤除菌后的OHP2溶液按照初始浓度7000 nmol/L，7倍稀释的比例给予A11A细胞，继续于37°C，5% CO₂培养箱中孵育4 h。然后将稀释好的荧光素酶底物按照每孔100 mu;L的量加入，在摇板机中室温振摇15 min（350 rpm），从孔中吸取180 mu;L转移至白板中，于多功能酶标仪中检测化学发光值。
2. OHP2湿度稳定性考察
3. OHP2温度稳定性考察样品制备：取四个洁净玻璃干燥器，配制不同种类的饱和盐溶液（饱和CH₃COOK·11/2H₂O溶液对应20.4%相对湿度、饱和Na₂Cr₂O₇溶液对应50.0%相对湿度、饱和KCl溶液对应82.3%相对湿度），称取10 mg的OHP2（同一批次），于称量瓶底部摊成le;5mm厚的薄层，开口放置于盛有不同饱和盐溶液干燥器中。于1 h、2 h、4 h、6 h、12 h、24 h分别取出供试品，观察外观。另外，称取相同量的OHP2（同一批次）作为对照。
4. 湿度对OHP2结构的影响：实验方法同上
5. 湿度对OHP2活性的影响：实验方法同上
6. OHP2光照稳定性考察
7. OHP2光照稳定性考察样品制备：称取10 mg的同一批次OHP2于称量瓶底部摊成 le; 5 mm厚的薄层，放置于ISO10977 (1993) 标准的室外日光灯下。于1 h、2 h、4 h、6 h、12 h、24 h分别取出供试品，观察外观。另外，称取相同量的OHP2（同一批次）作为对照。
8. 光照对OHP2结构的影响：实验方法同上
9. 光照对OHP2活性的影响：实验方法同上

三、研究难点

1. 不同温度、湿度和光照条件处理后样品的保存非常关键，保存不当的情况下会造成样品继续降解，影响稳定性测定结果。

2. 光照稳定性实验中，不同光源的使用会对光照条件存在影响，整个过程中需要使用校正过的光强度计/照度计监测光照条件。

四、进度安排

2020年3月 了解课题内容，查阅相关文献，书写开题报告；

2020年3月 ~4月 OHP2温度和稳定性测定；

2020年4月 ~5月 OHP2湿度稳定性测定；

2020年5月 ~6月 OHP2光照稳定性测定；

2020年6月 总结资料，撰写论文，答辩。

五、参考文献

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六、综述

多肽和蛋白质类药物的稳定性

摘要：多肽和蛋白质类药物生物活性强，药效高，副作用低，针对性强，具有良好的特异性及靶向性。但是多肽分子的体内外稳定性均较差，影响其稳定性的因素较多，容易变性或被各种酶解且降解速度快，所以此类药物的发展受到了限制。现今关于多肽和蛋白质类药物的结构稳定性研究的新技术、新方法日新月异, 新成果也不断涌现。

关键词：多肽和蛋白质类药物，稳定性，脱酰胺反应，PEG修饰，糖基化修饰

Abstract: Peptide and protein drugs have strong biological activity, high efficacy, low side effects, strong pertinence, and good specificity and targeting. However, the stability of peptide molecules in vivo and in vitro is poor, and there are many factors that affect its stability, which are easily denatured or digested by various enzymes and degraded quickly, so the development of such drugs is limited. New technologies and new methods for the structural stability research of peptides and protein drugs are changing with each passing day, and new achievements are constantly emerging.

Key Word: peptide and protein drugs, stability, deamidation, PEG modification, glycosylation modification

一、多肽和蛋白质类药物介绍

多肽是alpha;-氨基酸以肽链连接在一起而形成的化合物，它也是蛋白质水解的中间产物，N条多肽链按一定的空间结构缠绕纠结就构成了蛋白质。大分子蛋白质水解会生成多肽，此类药品为生化制剂。现今生物技术越来越走在前沿，多肽和蛋白质类药物在临床上的应用也越来越广泛，例如大分子蛋白、抗体、杂交融合蛋白、抗体-药物结合物和治疗性肽等等。多肽和蛋白质类药物在治疗肿瘤、糖尿病、心血管疾病、肢端体肥大症、 骨质疏松症、胃肠道疾病、中枢神经系统疾病、免疫疾病以及抗病毒、抗菌等方面具有显著的疗效，发挥了重大作用^[1]。

二、多肽和蛋白质类药物的特点

多肽和蛋白质类药物生理活性强，免疫原性低，其本身是人体内源性物质或针对生物体内调控因子研发而得，通过参与、介入、促进或抑制人体内或细菌病毒中生理生化过程而发挥作用，副作用低，药效高，针对性强，具有良好的特异性及靶向性。代谢产物主要为氨基酸，毒副作用小，不易蓄积于体内从而造成积累性中毒。

多肽和蛋白质类药物虽然具有独特的优势，但与传统的小分子化学药物相比，其自身固有的缺点也限制了其发展。即多肽分子的体内外稳定性均较差，影响其稳定性的因素较多，容易变性或被各种酶解且降解速度快，而且体内半衰期短，口服利用度低，需要连续注射给药以维持其药效，加重了患者身心、经济的负担。

三、多肽和蛋白质类药物的体外稳定性

多肽和蛋白质类药物产品的体外稳定性影响因素很多, 主要是温度、pH、氧化等等。蛋白变性失活模型最初是由Lumry Eyring提出的：

N harr; D → I

根据这个模型，天然结构N与分子伸展状态的D是可逆的，随后在一系列变化过程影响下, 不可逆的失去活性而成为I^[2]。引起蛋白质类药物不稳定的因素主要可分为化学因素和物理因素^[3,4]，前者系指蛋白质通过成键或断键生成新的化合物；而物理不稳定性则不涉及蛋白质的共价键变化，指蛋白质高级 (二级或以上) 结构的改变, 包括变性、表面吸附、凝聚和沉淀。

影响多肽稳定性的因素包括脱酰胺、氧化、水解、二硫键错配、消旋、beta;-消除、聚集等，研究显示合成多肽中最常见的降解产物是脱酰胺产物、氧化产物、水解产物^[5]。

• 1. 多肽和蛋白质类药物的化学稳定性

在一定溶液条件下蛋白质的一些基团会发生化学反应。脱酰胺和氧化是两个最常观察到的现象。

3.1.1 脱酰胺反应

在组成多肽的各种氨基酸中，天冬酰胺、谷胺酰胺易于发生脱酰胺反应（尤其是在pH值升高和高温条件下）；在脱酰反应中，天冬酰胺、谷胺酰胺残基水解形成天冬氨酸、谷氨酸，属于非酶催化的脱酰胺反应的进行。在天冬酰胺-甘氨酸-结构中的酰胺基团更易水解，位于分子表面的酰胺基团也比分子内部的酰胺基团易水解^[6]。

3.1.2 氧化反应

多肽溶液易氧化的主要原因有两种，一是溶液中有过氧化物的污染，二是多肽的自发氧化。在所有的氨基酸残基中，甲硫氨酸、半胱氨酸、组氨酸、色氨酸、酪氨酸等最易氧化，对光照也较为敏感。这些氧化过程受过渡金属离子的催化和光的诱发，氧分压、温度和缓冲溶液对多肽和蛋白质类药物的氧化也都有影响^[7]。

3.1.3 消旋

除甘氨酸外，所有氨基酸残基的alpha;碳原子都是手性的，易在碱催化下发生消旋反应。其中天冬氨酸残基最易发生消旋反应^[8]。

3.1.4 pH

pH的变化对蛋白质的活性有很大的影响, 即使很小的变化 (1-2pH单位) 也可能造成以前不带电的基团离子化或使原来带电的基团去离子化, 从而使已折叠的构象不稳定。剧烈的pH变化则使易被酸或碱破坏的键断裂^[8]。

3.1.5 水解

多肽中的肽键易水解断裂。而天冬氨酸参与形成的肽链比其它肽键更易断裂，尤其是天冬氨酸-脯氨酸和天冬氨酸-甘氨酸肽键。

• 1. 多肽和蛋白质类药物的物理稳定性

3.2.1 温度

温度是影响蛋白质多肽稳定性最重要的因素。一般而言, 大多数蛋白质在0~4℃之间较稳定。大多数的热变性都是不可逆的。一些蛋白质对溶液的冻融很敏感。在对溶解度的研究中发现, 随着温度的降低, 疏水相互作用及静电相互作用减弱, 氢键增强。高的电解质浓度将强化疏水相互作用。在pH过高或过低的情况下, 静电排斥作用和具有异常pKa值基团的暴露将控制分子之间弱相互作用的变化^[4,9]。

3.2.2 变性、吸附、聚集或沉淀

变性一般都与三级结构以及二级结构的破坏有关。在变性状态，多肽往往更易发生化学反应，活性难以恢复。在多肽变性过程中，首先形成中间体。通常中间体的溶解度低，易于聚集，形成聚集体，进而形成肉眼可见的沉淀。

蛋白质的表面吸附是其分离纯化及保存、使用过程中遇到的另一个令人头痛的问题。稀蛋白质溶液更易发生吸附, 这个现象几乎在蛋白质与固相表面接触的同时即会发生, 最大量的吸附往往发生在蛋白质的等电点附近。如rI L-2在进行曲灌注时会吸附在管道表面，造成活性损失^[10]。

• 1. 多肽和蛋白质类药物的热力学稳定性与动力学稳定性

多肽和蛋白质类药物的热力学稳定性又称构象稳定性，指在体外条件下蛋白质的天然折叠构象抵抗外界因素诱导其展开变性能力^[11]。此类药物的热力学稳定性通常可用吉布斯能表示。因此，蛋白多肽展开变性后与其天然结构的吉布斯能差即可作为衡量蛋白稳定性的一个重要指标，差值越大，表明需要引起蛋白多肽展开变性的能量越高，则该蛋白多肽越稳定^[12]。

多肽和蛋白质类药物的动力学稳定性又可称之为长期稳定性，指蛋白多肽在体外非自然条件下 (温度、p H值、溶剂、盐浓度等不利条件) 抵抗不可逆结构变化的能力^[13,14,15]。动力学稳定性是衡量蛋白质展开的速度，从而衡量其抵抗不可逆失活的能力^[13,14]，通常用半衰期 (t_1/2) 来表示。在讨论蛋白多肽不可逆变性并探寻应对措施时，动力学稳定性或展开速度有着十分重要的意义。从动力学稳定性角度而言，蛋白多肽展开速度越慢，则代表该蛋白多肽越稳定。

1. 提高多肽和蛋白质类药物体外稳定性的方法及策略
   1. 物理途径
      1. 添加蛋白质稳定剂

在液体介质中，蛋白多肽分子的结构稳定性受到蛋白多肽分子与周围溶剂分子相互作用的广泛影响。通常可通过加入适当的蛋白质稳定剂来改变液体介质的组成，以调控蛋白多肽分子与其他溶剂分子的相互作用，从而提高蛋白质、多肽类药物的稳定性^[16]。

最简单有效的稳定剂是离子化合物的盐类^[4]。盐类可以与蛋白质进行非特异性的结合，进而减缓蛋白质的可逆性变性；即使是非金属蛋白质，也会存在一些特异性的离子结合位点。离子的结合能增加蛋白质的热稳定性，如钙离子的多点接触，使蛋白的刚性增加，淀粉酶及胰蛋白酶就是很好的例子。离子结合也能用来控制物理不稳定性，如凝聚和沉淀^[17]。

表面活性剂 (包括阴离子和非离子型) 常作为添加剂以稳定蛋白质, 阴离子类的十二烷基硫酸钠可影响蛋白质的变性，还可影响食物蛋白质的脱酰胺反应。非离子型表面活性剂如吐温和聚醚能防止蛋白质吸附于表面，而抑制其凝聚和沉淀，阻止其变性。这些表面活性剂还具有另一优点，即能促进蛋白质经皮肤和气道转运。

低浓度的多元醇类^[18]如甘油和糖类通过对蛋白质选择性的溶剂化防止其变性而稳定蛋白质。可使更多的水分子包裹蛋白质以排斥更多的疏水性添加剂，从而增加蛋白质的稳定性^[19]。

• • 1. 冷冻干燥制剂

由于很多蛋白质、多肽类药物在溶液中十分脆弱, 很难达到或维持长期稳定性要求, 所以采用冷冻干燥技术将此类药物制成固态制剂, 为提高其物理稳定性提供另一种有效的思路。一方面, 蛋白质与多肽在冷冻干燥之后其分子在介质中的热运动及相互作用大大降低, 降解变性的概率则大大下降, 能较好地维持其结构稳定^[20]。

• 1. 化学途径

用修饰剂对蛋白类药物进行化学修饰, 可以改变它们的生物分配行为和溶解行为, 如可以消除药物的免疫原性和免疫反应性, 降低其毒副作用, 减少酶对药物分子的破坏, 延长在体内的作用时间, 增强药物的物理、化学和生物稳定性等^[21]。

• • 1. 定点突变

研究表明，引起蛋白质、多肽类药物化学降解的反应大多涉及某些特定的氨基酸残基的侧链取代^[22]。定点突变是一种使氨基酸取代蛋白质的特定部位的方法，取代易受影响的功能团则可以改变蛋白质的原有氨基酸排列顺序从而增加其化学稳定性。

• • 1. 聚乙二醇化修饰

聚乙二醇 (polyethylene glycol, PEG) 是一种线性、亲水、灵活而不带电的高分子聚合物。用亲水性试剂对蛋白质进行修饰, 以促进额外的氢或离子键的形成, 因在分子中如引入更多的亲水基团, 稳定作用就更大。聚乙二醇类修饰剂可抵抗蛋白酶降解、毒性小、无抗原性、溶解性好且具有FDA认证的生物相溶性，是目前此类药物最常用的修饰剂^[23]。

• • 1. 糖基化修饰

糖基化是指多肽的氨基和单糖还原端的羰基在温和条件下经一系列变化成为较稳定的糖肽的过程, 是一种较为理想的稳定多肽类药物的方式, 主要包括N-糖基化、O-糖基化、C-糖基化以及糖基磷脂酰肌醇修饰等^[24]。

• • 1. 环肽化修饰

通过二硫键的插入使多肽首尾相连形成环肽或者利用半胱氨酸形成分子内小环，使肽链失去游离的氨基和部分，与直链肽段相比，环肽具有更好的结构稳定性。而且成环的掺杂分子内会形成二硫键或者盐桥，这些相互作用会进一步提高其稳定性。

五、展望

目前, 蛋白质、多肽类药物结构稳定性研究的新技术、新方法日新月异, 新成果也不断涌现。通过蛋白质组学、基因工程手段可对蛋白多肽的不稳定结构进行改良, 新型的制剂手段不仅可改善蛋白多肽的体内外稳定性, 还能实现缓释、控释、靶向等多功能递药方式。随着研究的进展和各种技术手段的不断提高, 相信蛋白质、多肽类药物在未来将具有不可估量的应用前景。

六、参考文献

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开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）

一、课题的研究背景、意义和目的

胰高血糖素样肽-1（GLP-1） 是由人胰高血糖素基因编码，并由人体回肠和结肠分泌细胞L细胞分泌的一种脑肠肽类激素^[1]。GLP-1通过葡萄糖依赖方式作用于胰岛beta;细胞，促进胰岛素基因的转录，增加胰岛素的生物合成和分泌^[2]；刺激beta;细胞的增殖和分化，抑制beta;细胞凋亡，从而增加胰岛beta;细胞数量^[3]，抑制胰高血糖素的分泌^[4]，抑制胃排空^[5]，减少肠蠕动，降低食欲，有助于控制摄食，减轻体重，这些功能都有利于降低餐后血糖并使血糖维持在恒定水平。因此GLP-1可以被用于开发降糖药物，目前主要作为2型糖尿病药物作用的靶点^[6]。然而，要将GLP-1应用于临床也面临着问题，那就是人体自身产生的GLP-1在人体内具有生物活性的主要形式是GLP-1（7-37），极易被体内的二肽基肽酶Ⅳ（DPP-Ⅳ）降解，其血浆半衰期不足2分钟^[7]，必须持续静脉滴注或持续皮下注射才能产生疗效，这大大限制了GLP-1的临床应用。

因此想要做出临床上的成药，就必须想办法延长GLP-1受体激动剂的半衰期。所以目前上市的GLP-1受体激动剂类药物设计思路主要分两种：以GLP-1为原型进行半衰期延长改构，以Exendin-4为原型直接改造^[8]。例如由诺和诺德开发的利拉鲁肽（liraglutide，Victoza reg;）在GLP-1的第20位赖氨酸上进行脂肪酸链修饰，在不影响与GLP-1受体亲和力的情况下有效延长了其半衰期，可以达到每日注射一次的给药间隔^[9] 豪森药业自主开发的聚乙二醇洛塞那肽是在艾塞那肽的基础上进行氨基酸改造和聚乙二醇化修饰，其作用机制与艾塞那肽相似，通过PEG的修饰使洛塞那肽的代谢减慢，体内作用时间延长^[10] 但是目前市场上绝大多数GLP-1受体激动剂药物都是注射剂型，只有2019年9月获FDA批准的由诺和诺德开发的口服semaglutide（oral semaglutide，Rybelsusreg;）是口服剂型^[11]。它口服剂型的API（活性医药成分，原料药）和注射剂型的API完全一致，主要是通过添加一种叫做SNAC（8-(2-羟基苯甲酰胺基)辛酸钠）的促吸收剂的手段来达到使其可以口服吸收的目的^[12]。

实验室前期设计的口服降糖多肽分子OHP2，便是以Exendin-4分子为原型，在此基础上对肠道内主要酶类（胰蛋白酶、靡蛋白酶、弹性蛋白酶）的酶切位点氨基酸进行突变，并在此基础上保留GLP-1受体激动活性，最终获得了具有口服降糖能力的多肽分子OHP2。体内动物实验结果表明OHP2可以有效降低糖尿病模型小鼠的空腹血糖和糖化血红蛋白，改善糖耐量和胰岛素耐量，并且可以改善脂质和能量代谢、减少组织损伤等^[13]。但是药代动力学实验结果表明，直接口服OHP2生物利用度仅为1.3% 仍处于较低水平，考虑到OHP2并不耐受胃蛋白酶的降解作用，需要在肠道吸收，故需要对OHP2进行处方设计和制剂研究，此时OHP2的稳定性研究就显得尤为重要。原料药的稳定性是指其保持物理、化学、生物学和微生物学特性的能力。按照化学药品审评标准中的规定，稳定性试验分为影响因素试验、加速试验、长期试验三个部分考察。合成多肽药物药学研究技术指导原则指出加速试验和长期试验应该在影响因素试验基础上进行选择，考察项目除常规项目外，还需考察其生物活性的变化。

本课题拟针对实验室前期筛选获得的口服降糖多肽OHP2，通过高效液相色谱法和荧光素酶报告基因法对OHP2的温度稳定性、湿度稳定性、光照稳定性进行测定，确定OHP2在制剂过程中所需条件，帮助后期OHP2的处方设计和制剂筛选。

二、实验内容