广西红树林放线菌资源的勘探与发现文献综述

一、研究目的1.原位培养获得的菌株的发酵2.完成原位培养获得菌株的抗耐药菌活性筛选。

3.发现强抗耐药菌的未培养放线菌及新物种。

二、研究内容1.红树林植物根际土壤放线菌的保存和活化将原位培养获得的放线菌进行分离纯化，保存在20%甘油的EP管中，-20℃预冻后，-80℃保存。

2.原位培养获得放线菌的液体发酵将原位培养获得的代表放线菌置于120mlISP2液体培养基中，在28℃，180r/min的摇床中发酵，约一周后，将菌体和发酵液分离。

菌体置于丙酮，放置过夜后取上层清液，自然风干后用3ml甲醇洗3次保存在EP管中，冻存。

发酵液用等体积的乙酸乙酯萃取，分离脂相和水相，脂相旋蒸至全干后用3ml甲醇洗3次保存在EP管中，冻存。

水相自然风干后用3ml甲醇洗3次保存在EP管中，冻存3.原位培养菌株的生物活性筛选以临床亟需解决的ESCAPE6种耐药菌株和其他临床耐药真菌为测试对象，采用琼脂纸片扩散法或96孔Alamar Blue细菌细胞增殖法对原位培养菌株发酵液的酯相、水相及菌丝体的丙酮浸提液进行抗菌活性筛选，发现强抗耐药微生物资源菌株。

4.针对新颖的原位培养菌株开展多相分类学鉴定。

对潜在新物种的原位培养菌株在形态培养特征，生理生化特征，细胞化学组分和分子水平进行分析，确定其分类地位。