开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
1，课题来源、选题依据和意义：
慢性肾脏疾病（CKD）是影响肾脏结构和功能的异质性疾病的总称。全球发病率估计为8-16％，在我国达到了10-13%。已经成为一个突出的公共健康问题。慢性肾脏疾病被定义为肾小球滤过率降低，尿白蛋白排泄增加或两者兼有。透析和肾脏移植是大多数国家的主要治疗方法【1】。脏纤维化是一个发展过程，是所有慢性肾脏病（CKD）病情进展至终末期肾病（ESRD）的一种病理损伤过程。各种治病病因引起的CKD，病情进展到终末期肾衰竭（ESRF），其实质是肾脏纤维化、硬化形成造成的，从而导致有效肾单位的丧失和肾功能进行性下降。近年来很多研究表明，具有不同激活模式，不同渗透性质和整合多个下游信号的能力的瞬态受体电位（TRP）通道家族成员是肾功能的关键分子决定因素【2】。
TRPC6通道是TRPC亚家族的成员。TRPC6是一种非选择性阳离子通道，并由第二信使二酰甘油（DAG）直接激活，对Ca2 的渗透性比Na 高6倍。TRPC6 定位在肾脏的小管上皮细胞、足细胞、系膜细胞和内皮细胞上，其与肾小球疾病尤其是足细胞病的关系首先得到关注。最近研究表明，在小鼠单侧输尿管梗阻诱导的小鼠纤维化中，Trpc6-/- 的小鼠输尿管梗阻肾相对于野生型小鼠肾脏中单侧输尿管梗阻引起的间质性纤维化降低，纤维化相关基因的mRNA表达减少[3]，给予TRPC通道功能的吡唑衍生物抑制剂BTP2也降低野生型小鼠中梗阻诱导的肾纤维化和相关基因表达。因此TRPC6通道可能成为治疗肾纤维化的一个重要治疗靶点。
楔叶茶藨(Ribes diacanthumPall (RDP))为虎耳草科楔叶茶藨Ribes diacanthum的地上部分（叶、茎、果实），又称双刺茶藨子。，主要分布于中国的内蒙古、黑龙江北部、吉林东部以及朝鲜、蒙古东北部、俄罗斯的西伯利亚[4]。在传统蒙药中，楔叶茶藨广泛应用于各种原因引起的肾脏相关疾病如膀胱炎、膀胱感染、尿潴留和水肿，其水提物是蒙古国民间治疗泌尿系统疾病的有效药物，具有利尿和排石的功能，在《中国植物志》中亦有记载。果实可入中药，具有解毒功能【5】
本课题组先期分别考察了楔叶茶藨（RDP）对顺铂（CDDP）诱导肾损伤小鼠模型和单侧输尿管结扎肾损伤小鼠模型（UUO）两种不同损伤机制动物模型的保护作用。实验结果表明：RDP粗体物对肾脏具有保护作用【6】。但是在后续的研究中发现高浓度的RDP,RMK醇总提物对肾脏的保护作用效果变差(并不理想) 。为寻找茶藨中抗纤维化的活性物质基础以及高浓度的RDP,RMK醇总提物对肾脏的保护作用效果并不理想的原因，通过植物化学方法从两种茶藨中共分离得到52个化合物。进一步用TGF-beta;诱导HK-2纤维化的细胞模型以及利用FLIPR在稳定表达TRPC6通道的HEK293细胞上的筛选模型，来分别考察两种茶藨总醇提物不同部位及单体化合物的抗纤维化及对TRPC6通道的作用。1、在TGF-beta;诱导HK-2纤维化的细胞模型实验结果表明：RDP,RMK总醇提物石油醚部位及来源于此部位的单体化合物RDP-19不具有抗纤维化的作用，并且使细胞活力显著降低。2、在以TRPC6通道为靶点的筛选实验结果表明：正丁醇、乙酸乙酯部位及来源于此部位化合物D-7，M-30，M-31 能够抑制TRPC6通道激动剂M085诱导的由TRPC6介导的Ca2 内流，同时石油醚部位及来源于此部位化合物RDP-19能够激活TRPC6通道引起细胞内钙增加。以上先期实验表明RDP-19可能是造成高浓度的RDP,RMK醇总提物对肾脏的保护作用效果不理想的很重要的原因。
通过文献调研RDP-19名为conocarpan(CNCP), 新木脂素类化合物。最早是在用于海洋建造的木材里为了确定木材中防虫蛀的主要成分而发现的，在1975年最初确定了其结构和构型。在很多植物中(主要是热带、亚热带植物) piperacea、Piper decuments、Piper Solmsianum C.DC.、Piper regnellii C.DC.Val.Pallescens(C.DC)Yunk、Krameria triandra Roots、Krameria lappacea Roots也发现了化合物Conocarpan。其生物活性包括，抗锥体虫、抗菌、抗真菌剂和光保护活性，尤其是抗锥体虫（anti-chagas）的作用研究较多。
基于以上实验提出选题依据：
1、在用两种茶藨研究肾保护作用时，当给药浓度过大时肾保护作用效果并不理想，可能由于表现出细胞毒的RDP-19(CNCP)导致的。
2、在之前实验研究的基础上，单独对化合物RDP-19(CNCP)对肾小管上皮细胞的细胞毒性做进一步深入的探讨和研究，了解其毒理学机制，以保证茶藨在后续开发为抗急慢性肾损伤的有效治疗药物或保健品的安全性及有效性。
