开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
一、研究问题：
1.1课题背景
肿瘤的生长存在着两个阶段，即无血管的缓慢生长阶段和有血管的快速增殖阶段［1］。前一阶段肿瘤细胞主要通过弥散来获得营养，这时肿瘤直径不会超过2-3mm，而新生的血管为肿瘤提供营养，带走肿瘤的代谢产物，为肿瘤生长创造有利条件。肿瘤通过产生促血管生长因子浓度上升和/或抑制因子浓度下降的方式，从而导致血管形成［2］。在众多肿瘤诱导的血管生成因子中，VEGF被认为是最主要的、特异性的一种内皮细胞生长因子，它不仅为肿瘤细胞的生长和新生的毛细胞血管网的形成提供营养，还利于癌细胞脱落进入血管或向邻近纤维蛋白和结缔组织基质扩散，此方式为肿瘤的浸润、转移创造条件。VEGF 可在健康人体的多数组织中检出, 但表达量甚微,在肿瘤细胞中则超量表达[ 3~ 5]。由于实体瘤的生长和转移对新生血管的依赖性, 因此VEGF是阻断肿瘤血管形成比较理想的靶部位。
由于在胚胎发育初期机体即对其产生免疫耐受，因而作为一种肿瘤相关抗原，VEGF具有抗原性弱的特点。为了提高它的免疫原性，需要添加免疫辅助片段。用PCR介导的定点突变技术，分别将hVEGF121的1-8位和115-121位两个肽段突变为破伤风毒素（TT）的两个强表位：第618-627位和831-838位构建了hVEGF121突变体Ⅰ［6］。在hVEGF121突变体Ⅰ的C末端引入了热休克蛋白mHSP70分子中具有免疫激活调节作用的407-426片段（M序列）[7]串联两次，以柔性肽连接于hVEGF121突变体Ⅰ的C末端，突变基因与载体pET28a重组后转入大肠杆菌BL21，成功构建表达了hVEGF121突变体Ⅱ。
本课题拟通过发酵培养hVEGF121突变体Ⅱ的宿主菌，经乳糖诱导表达，菌体裂解、包涵体洗涤、包涵体裂解复性，再经DEAE-Cellulose离子交换柱层析得到电泳纯的目的蛋白，探索人源血管内皮生长因子突变体Ⅱ(hVEGFⅡ)的高效表达，并研究hVEGFⅡ蛋白的免疫学性质。
二、研究手段：
2.1蛋白表达纯化：
大肠杆菌经诱导表达后，裂解细菌→洗包涵体→裂解包涵体→包涵体裂解液透→DEAE-cellulose层析→收集液复性和冻干等步骤，得到目的蛋白。
2.2 hVEGFⅡ对小鼠H22实体瘤的抑制作用实验：
