开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)
一、研究背景
人类表皮生长因子受体2(HER2) 在乳腺癌、卵巢癌、胃癌、肺癌、前列腺癌中均存在不同程度的过表达,配体与受体结合后,使 HER2与其家族成员发生二聚化,从而激活 MAPK、PI3K 等信号通路,促进细胞增殖, 防止细胞凋亡,HER2在肿瘤中过表达以及具有细胞外结构域的特点,使之成为抗体药物研发的一个理想靶点;程序性死亡1-配体(PDL1) 作为 B7家族的新成员,与受体结合后可以提供抑制性信号,抑制T细胞的活化和增殖,诱导T细胞凋亡,使肿瘤细胞逃避免疫杀伤,人类多种肿瘤组织中都可检测到 PDL1 的表达,提示了PDL1在抗肿瘤免疫中的负性调控作用,阻断PD-1/PDL1信号通路可增强机体内源性抗肿瘤免疫效应,PDL1成为肿瘤免疫治疗的靶点。
构建HER2与PDL1融合蛋白,免疫机体产生的抗体,一方面抑制了表皮生长因子与HER2的结合,使高表达HER2的肿瘤增值受抑制,另一方面阻断了PDL1/PD1途径,使T细胞重新发挥免疫杀伤作用,从而发挥抗肿瘤作用。
二、研究目的及意义
目的:表达高纯度的蛋白,并测定免疫原性,筛选出最佳给药剂量与部位,为后期抗肿瘤疫苗效果评价做准备。
意义:选用肿瘤细胞高表达的分子构建重组融合蛋白,抑制肿瘤细胞的生长,增强机体抗肿瘤效应,为肿瘤治疗提供一种高效方法,也为后续肿瘤疫苗的开发提供借鉴意义。
三、实验方案
(1)HER2-PDL1的表达纯化
a)培养含有表达这三种蛋白的DNA的工程菌
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