实验目的:
本实验拟从基因工程发酵的废酵母中提取葡聚糖,葡聚糖是一种免疫增强剂,主要目的是优化从酵母菌中提取葡聚糖的方法。
实验背景:
大量研究表明,酵母细胞壁中 60%是多糖,其主要成分是葡聚糖和甘露聚糖。有研究认为,酵母细胞壁中存在的 beta;-1,6-分支的碱不溶性和碱溶性 beta;-1,3-D-葡聚糖、中间插有 beta;-1,3-键的无定型的酸溶性 beta;-1,6-D-葡聚糖、多糖类化合物是啤酒酵母中活性成分之一。它们在人的消化道中难以被消化, 可以作为膳食纤维发挥作用, 并具有增强免疫力、提高巨噬细胞活性、抗病毒等功效; 酵母多糖在食品中还可做增稠剂; 还有保湿、成膜、无刺激性的特点。故广泛用于医药、食品、化妆品、饲料等行业, 也被称为生物反应修饰物(BRM) 。随着天然功能性成分提取研究的兴起,酵母多糖的提取、分离纯化以及高产菌株筛等已成为国内外学者研究的热点,目前研究证实,多种免疫细胞表面具有能与葡聚糖结合或对其作出反应的接收器,酵母多糖可对免疫细胞产生积极的功效。
葡聚糖主要由 beta; - 1,3 葡萄糖苷键连接聚合而成,葡聚糖具有抗肿瘤、促进和激活人体免疫力等功能,另外,葡聚糖是低热量食品,不易消化,因而可以减少血糖含量,预防糖尿病。甘露聚糖主要由 alpha; -1,6 甘露糖苷键连接聚合而成,支链上主要是 alpha;-1,2 甘露糖苷键和 alpha; -1,3 甘露糖苷键,甘露聚糖可以防止病原菌在肠道中繁殖,减少肠道疾病的发生,也可以
作为免疫刺激因子,提高人体免疫力。
由于啤酒酵母细胞具有非常坚韧的细胞壁,细胞内的营养成分难以释放,因此寻求高效且污染较小的啤酒酵母多糖提取方法成为相关研究的热点问题。国外对酵母多糖的研究主要集中在高产酵母多糖菌株的筛选、发酵条件优化以及多糖分离纯化等方面;国内对于酵母多糖的提取主 要采用传统热水浸提法,该法耗时长、温度高且对酵母多糖的生物活性有一定的影响;此外,也有采用超声波技术提取酵母多糖的报道,但提取方法单一,效果一般。关于不同提取酵母多糖方法比较的研究还较少,故本研究综合了两种办法优化选取了几种方法的运用以期其发挥协同作用,达到最佳分离提取效果。
实验步骤:
主要的采用碱解法细胞破壁,辅助超声波破壁。
