1. 研究目的与意义
天冬氨酸酶（aspartase）属于氨基酸解氨酶的一种，可以催化可逆的天冬氨酸脱去一分子氨生成富马酸的反应，是生物体内氨基酸代谢过程中的重要酶。
来自芽孢杆菌（bacillussp.）的耐热性天冬氨酸酶aspb已在上世纪70年代被工业界利用生产天冬氨酸，作为食品和饲料的添加剂及工业原料。
aspb具有催化效率高，稳定性高，所催化的反应极具价值。
2. 研究内容和预期目标
本实验主要内容可以分为以下几个部分：
1 对野生型菌种进行活力验证；
2 提取野生型菌种的总dna
3. 研究的方法与步骤
| 3．本课题拟采用的研究方法、步骤 1 总DNA提取 首先提取嗜麦芽寡养单孢菌的基因组DNA：挑取单菌落至含有丰富培养基II的试管中培养24h，离心收集菌体并洗涤两次。按照说明使用细菌基因组DNA提取试剂盒对目标菌的基因组DNA进行提取。 2 目的基因扩增实验步骤如下：将得到的基因组DNA通过琼脂糖电泳进行验证。如果大小正确，则以基因组DNA为模板，通过生物信息学分析其可能存在的序列，通过基因数据库分析，初步设计的引物进行扩增，引物的序列为： 1 Forward (5’-3’): CGGGATCCCGATGTTAAACAACATTCGTATCG (BamHI) 1 Reverse (5’-3’): CCAAGCTTGGTTACTGTTCGCTTTCATCGG (HindIII) PCR反应体系(30 μL)及反应条件如下：DNA聚合酶及缓冲体系：2×Taq Plus PCR MasterMix，15 μL；模板：假单胞菌ECU1011基因组DNA，4 μL；引物：16SrDNA-F，1 μL；16SrDNA-R，1 μL；dd H2O，9 μL。 反应条件： 95C 5 min 94C 45 s 52C 45 s 30 cycles 72C 1.5 min 72C 延伸5 min 反应产物经琼脂糖电泳检验为正确长度后，利用胶回收试剂盒将目的片段回收纯化，进行DNA序列测定。 3 测定对天然底物L-天冬氨酸的活力对获得的蛋白（以细胞破碎液的形式）利用天冬氨酸进行活力鉴定，检测方法为分光光度法（富马酸在240 nm下的消光系数为2.53×103M-1cm-1）和HPLC方法。 |
4. 参考文献
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5. 计划与进度安排
1 2022 11-2022 12 查阅文献，撰写开题报告和前言
2 2022 12-2022 02 大肠杆菌中克隆并表达来自嗜麦芽寡养单孢菌ib1天冬氨酸酶
