1. 研究目的与意义
本实验属于分子生物学中的基因重组内容，以人类中心体蛋白FOR20为研究对象，对该基因进行体外扩增，将该基因剪切后插入载体中转入大肠杆菌，在大肠杆菌中进行表达的过程
随着现代分子生物学的发展，越来越多的生物蛋白大分子被提取出来，不同的蛋白质在机体中发挥着不同的作用，蛋白质是生命活动的主要承担着。FOR20蛋白是一种在细胞分裂过程中发挥着重要作用的一种功能蛋白。其中的LisH结构域作用广泛。在细胞分裂的S期和细胞质的分裂期间具有重要作用。现在学术界对于此蛋白的研究还相对较少，随着越来越多的人的关注，该蛋白的功能将会越来越多的被发掘出来，该蛋白的研究将会对分子生物的研究产生重要的影响。
本实验设计先对人类蛋白hFOR20进行初步分析，然后利用生物相关技术对其进行表达和检测。实现hFOR20蛋白的提纯，让我们更加直观地去理解了hFOR20蛋白，对其结构域、蛋白序列以及蛋白性质的研究提供便利
2. 研究内容和预期目标
具体可以概括为以下几个方面的内容：1.查找文献，确定细胞中所要研究的蛋白序列2.根据蛋白序列和所需要的载体序列设计蛋白质的引物序列3.提取基因组，利用酵母基因组进行目标序列的扩增4.纯化目标序列，将目标序列插入载体中5.将重组的质粒转入到大肠杆菌中进行表达
预期目标：将目的基因成功导入受体细胞，表达出目的蛋白
3. 研究的方法与步骤
利用DNA重组技术，按“切、接、转、增、减”的流程实现对于目的基因的切取、拼接、插入、扩增、表达和检测。具体步骤有引物设计、菌种活化及质粒抽提、感受态细胞的制备、PCR技术扩增目的基因、PCR产物的琼脂糖凝胶电泳及胶回收、质粒和目的基因的酶切、载体与目的基因的连接、重组DNA转入受体细胞表达、蛋白质表达技术（大肠杆菌）、聚丙烯酰胺凝胶电泳
4. 参考文献
1.吴乃虎.“基因工程原理第二版上册”（1999）.
2.吴乃虎.“琼脂糖凝胶电泳。”遗传工程1（1983）：0.8.
3. feng s, song y, shen m, xie s, li w, lu y, yang y, ou g, zhou j, wang f, liu w, yan x, liang x, zhou t. microtubule-binding proteinfor20promotes microtubule depolymerization and cell migration. cell discov. 2017 sep 5;3:17032.
4. harmer j, qi x, toniolo g, patel a, shaw h, benson fe, ginger ml, mckean pg. variation in basal body localisation and targeting of trypanosome rp2 andfor20proteins. protist. 2017 aug;168(4):452-466.
5. 计划与进度安排
（1）2022-2022-1学期17-20周~2022-2022-2学期第1周~第2周（2022-12-25~2022-3-16），查阅资料，目的基因序列的确定，准备开题报告，外文论文翻译； （2）第3周~第6周（2022-3-19~4-13），设计引物、选择合适酶切位点、质粒抽提、细胞培养等实验、初步设计；（3）第7周~第11周（2022-4-16~5-18），目标基因扩增、剪切、载体连接、转化、细胞培养、转化子的检测以及重组子的细胞表达等（4）第12周~第14周（2022-5-21~6-8），整理、撰写论文，完成；一张基因扩增电泳检测图、一张质粒酶切电泳检测图，一张重组子构建检测图以及一张蛋白表达电泳图（5）第15周~第16周（2022-6-11~6-19），提交重组子构建的重组细胞、实验报告、英文翻译、图表等，毕业答辩。
