1. 研究目的与意义
背景：随着现代分子生物学的发展，越来越多的生物蛋白大分子被提取出来，不同的蛋白质在机体中发挥着不同的作用，蛋白质是生命活动的主要承担着。
目的：以人类中心粒蛋白fornl为研究对象，对该基因进行体外扩增，将该基因剪切后插入载体中转入大肠杆菌，在大肠杆菌中进行表达。
意义：fornl蛋白是一种在细胞分裂过程中发挥着重要作用的一种功能蛋白。其中的lish结构域作用广泛。在细胞分裂的s期和细胞质的分裂期间具有重要作用。现在学术界对于此蛋白的研究还相对较少，随着越来越多的人的关注，该蛋白的功能将会越来越多的被发掘出来，该蛋白的研究将会对分子生物的研究产生重要的影响。
2. 研究内容和预期目标
本实验属于分子生物学中的基因重组内容，以人类中心体蛋白FORNL为研究对象，对该基因进行体外扩增，将该基因剪切后插入载体中转入大肠杆菌，在大肠杆菌中进行表达的过程。因此该实验包括目标基因的获取以及目标基因的扩增和重组表达，因此具体可以概括为以下几个方面的内容： 1.查找文献，确定细胞中所要研究的蛋白序列2.根据蛋白序列和所需要的载体序列设计蛋白质的引物序列 3.提取基因组，利用酵母基因组进行目标序列的扩增4.纯化目标序列，将目标序列插入载体中 5.将重组的质粒转入到大肠杆菌中进行表达
在引物设计准确完成的前提下需要经过质粒抽提、感受态细胞制备、电泳检测，实验过程复杂，可能会由于各种原因造成实验失败，需要不断进行，反复尝试，最终肯定会得到目的产物。
3. 研究的方法与步骤
研究方法：本次课题的研究方法为实验法，其依据现有的科学理论和实践的需要，提出设计，利用科学仪器和设备，在自然条件下，通过有目的有步骤地操纵，根据观察、记录、测定与此相伴随的现象的变化来确定条件与现象之间的因果关系的活动。主要目的在于说明各种自变量与某一个因变量的关系。
研究内容步骤：1、目标基因引物的设计； 2、目标基因的扩增与剪切，电泳检测、提纯、胶回收；3、质粒的培养，抽提与剪切，电泳检测；4、菌种过夜培养cacl2冷藏；5、制备感受态细胞；6、双酶切；7、目标基因与载体质粒整合；8、目的基因转入受体细胞，表达
4. 参考文献
1. feng s, song y, shen m, xie s, li w, lu y, yang y, ou g, zhou j, wang f, liu w, yan x, liang x, zhou t. microtubule-binding proteinfor20promotes microtubule depolymerization and cell migration. cell discov. 2017 sep 5;3:17032.
2. harmer j, qi x, toniolo g, patel a, shaw h, benson fe, ginger ml, mckean pg. variation in basal body localisation and targeting of trypanosome rp2 andfor20proteins. protist. 2017 aug;168(4):452-466.
3. sakane k, nishiguchi m, denda m, yamagchi f, magari m, kanayama n, morishita r, tokumitsu h. identification and characterization of a centrosomal protein,for20as a novel s100a6 target. biochem biophys res commun. 2017 sep 30;491(4):980-985.
5. 计划与进度安排
（1）2022-2022-1学期17-20周~2022-2022-2学期第1周~第2周（2022-12-25~2022-3-16），查阅资料，目的基因序列的确定，准备开题报告，外文论文翻译； （2）第3周~第6周（2022-3-19~4-13），设计引物、选择合适酶切位点、质粒抽提、细胞培养等实验、初步设计；（3）第7周~第11周（2022-4-16~5-18），目标基因扩增、剪切、载体连接、转化、细胞培养、转化子的检测以及重组子的细胞表达等（4）第12周~第14周（2022-5-21~6-8），整理、撰写论文，完成；一张基因扩增电泳检测图、一张质粒酶切电泳检测图，一张重组子构建检测图以及一张蛋白表达电泳图（5）第15周~第16周（2022-6-11~6-19），提交重组子构建的重组细胞、实验报告、英文翻译、图表等，毕业答辩。
