基于十六烷基三甲基溴化铵的荧光快速检测赭曲霉毒素A的研究开题报告

 2021-08-08 12:08

全文总字数:2747字

1. 研究目的与意义

赭曲霉毒素a(ota)是苯丙氨酸与异香豆素结合体衍生物,属于赭曲霉素(ochratoxin)中毒性最高、分布最广的一种毒素。

ota产生菌广泛分布于自然界,多种农作和食品,包括谷类、豆类已经相关产物都可能被ota污染,包括动物饲料中ota的污染也较为严重,动物吃过这种饲料之后会导致毒素在动物体内进行生物积累,ota若是没有被提前检测出来,在通过食物链进入人体之后,主要侵害肝脏、肾脏,在达到一定剂量之后出现病变,同时具有致畸、致癌、致突变毒性,对人类和动物健康可造成极大威胁。

在早些年已有很多国家建立了ota的检测标准,也试图采取一些办法杀死ota以避免其危害,然而实际上ota的性质较为稳定,且具有耐热性,蒸煮对其毒性不具有抑制作用,通过一般的行为方式很难保证完全避免遭受其危害。

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2. 国内外研究现状分析

目前世界范围里常用于ota的快速检测方法主要有酶联免疫技术、免疫传感器检测技术、化学发光酶免疫分析技术、胶体金免疫层析技术、时间分辨荧光免疫分析技术、免疫亲和柱层析净化-荧光光度法联用技术、荧光偏振免疫分析法、基于核酸适配体的检测技术和荧光比色技术等。

其中属酶联免疫分析技术(elisa)为目前真菌毒素快速检测领域的主流研究和应用技术,毕竟建立了一种用于检测ota的无毒检测实际盒,这种试剂盒结构简单、不含有对人体健康有危害作用的ota标准品,并且拥有使用方便、快速、成本低廉和灵敏度高等优点。

elisa法特异性强、灵敏度高和测定步骤简单,在大批量阴性样品检测方面有着很大的优势,它已成为应用最为广泛和发展最为成熟的生物检测与分析技术,但是存在检测结果重现性差、酶稳定性差、试剂寿命短和假阳性等缺陷。

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3. 研究的基本内容与计划

1.研究内容 十六烷基三甲基溴化铵(ctab)是一种阳离子表面活性剂,通常为白色或淡黄色晶体,其化学式为c16h33(ch3)3nbr,溶于热水、乙醇、三氯甲烷,溶于异丙醇水溶液中,微溶于丙酮,不溶于醚类。

赭曲霉毒素a(ota)在ph环境不同的时候拥有ota单阴离子和ota双阴离子两种不同的形态。

当溶液环境呈酸性时,其主要形态为ota单阴离子;当溶液环境呈碱性时,其主要形态为ota双阴离子,而当溶液环境为中性或偏弱碱性时,溶液中ota单阴离子和ota双阴离子同时存在。

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4. 研究创新点

在此之前,国内外有过对ota进行快速检测的方案设计,如免疫亲和柱层析净化-荧光光度法联合技术测定ota,能够通过抗体选择性地检测待检物质并产生与待检物质度相对应的可转换信号,具有快速、准确、灵敏以及可显著减少有毒有害试剂的使用的优点,但它的精确定量效果较差,只适用于ota快速筛选,而且免疫亲和柱比较昂贵,并不适合大批量检测。

这些方案大部分价格昂贵、成本高,准确度低、 精密度较差,并且重现度较低,所需样本量也较多,或者在某种程度上会对试验人员身体健康造成危害,这些因素限制了它们在实际生活中的应用情况。

本课题使用十六烷基三甲基溴化铵(cab)作为整个实验的基础,利用其对ota的特性把ota单阴离子转化为ota双阴离子,再使用荧光法进行检测,能够有效降低检测食品、饲料中ota存在性的困难程度,满足在最快最简便的方式下成功检测出食品饲料中可能存在的ota的需求,以此最大限度地预防其所能带来的各种危害。

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