红色荧光蛋白在大肠杆菌中的表达优化及纯化研究开题报告

1. 研究目的与意义

mcherry是一种来自于蘑菇珊瑚（mushroom coral）的红色荧光蛋白，常用于标记和示踪某些分子和细胞组分。

并且mcherry相对于其他单体荧光蛋白来说也具有卓越的光稳定性且灵敏度高。

但目前红色荧光蛋白在大肠杆菌中表达主要以包涵体形式存在，本研究希望提高红色荧光蛋白的可溶性表达，应用于表面展示系统的蛋白标记。

2. 国内外研究现状分析

1.红色荧光蛋白的改造与超分辨显微成像技术的改进； 2.His-TAT-mCherry融合蛋白的跨膜转导及其在细胞内的定位； 3.表达红色荧光蛋白的重组B组3型柯萨奇病毒构建及初步应用； 4.红色荧光蛋白mCherry中插入外源短肽位点的研究。

3. 研究的基本内容与计划

（1）内容： 1.红色荧光蛋白mCherry中插入外源短肽位点的研究； 2.构建重组质粒并测序； 3.获得表达最好的重组菌，通过his-tag-Ni柱亲和层析获得纯酶； 4.利用荧光显微镜观察红色荧光。

（2）计划： 2017年2月-2017年3月阅读相关文献并了解课题研究的内容及目的 2017年1月-2017年3月构建重组质粒 2017年3月-2017年4月进行大肠杆菌在mCherry红色荧光蛋白下的表达优化及纯化实验 2017年4月-2017年5月毕业论文及答辩

4. 研究创新点

本实验研究的Mcherry红色荧光蛋白光稳定性好，灵敏度高，且与eGFP绿色荧光蛋白激发波长重叠少，所以能进行共同标记实验。