P450 BM-3辅酶特异性的分子改造研究开题报告

1. 研究目的与意义

目的：定点突变，改变其利用的辅酶活性，筛选出最优突变； 意义：将细胞色素P450 BM-3从NADPH利用型突变成NADH利用型，首先是从经济价值上来考虑，因为辅酶NADPH比辅酶NADH价格要高很多，如果突变改造成功，这为以后的研究提供很好的基础，再者就是辅酶NADH比辅酶NADPH的来源要广泛很多，这可以为构建NADH辅酶再生系统提供很好的资源。

2. 国内外研究现状分析

jones等研究者们对p450cam定点突变的研究，使得在微生物对多氯联苯的氧化作用这一方面的研究大大加快。

french kj等研究者们通过对cyp 450cam中的4个活性位点进行突变，各个突变重组子能催化不同构型的2-辛醇生成辛醇酸。

通过在在基因序列上的87位和96位通过反应进行突变，在改性后生成了具有更好性能的f87w和y96w。

3. 研究的基本内容与计划

本研究主要是根据巨大芽孢杆菌p450单加氧酶的三维结构进行理性设计，选择关键位点进行定点突变，将重组酶的辅酶利用型由nadph利用型改造为nadh利用型。

构建定点突变重组子： s965a/r966a， k972a，w1046a和w1046h，将四种重组子进行表达，分析并比较其利用nadph和nadh的差异，筛选出最优突变。

计划：在12月到1月初以及2月到3月中旬完成几个定点突变；三月下半月进行几种突变对nadph和nadh两种酶的酶活比较，在这几种突变中找出最优突变；四月份开始做另一部分的实验，是对p450和fdh的改造中的一部分，目前还没有结果；期间还要完成开题报告，文献翻译以及每天记录和书写毕业论文等等。

4. 研究创新点

首次提出将利用NADPH为辅酶改为利用NADH为辅酶，NADH较NADPH更为稳定和便宜。