1. 研究目的与意义
癌症严重危害人类的健康，长期以来，虽然大量的抗肿瘤药物问世，但癌症的复发率、死亡率以及药物耐药性依然居高不下。肠癌包括结肠癌和直肠癌，是近几十年来发病数和死亡数在世界大多数国家和地区上升最快的肿瘤之一。世界上大肠癌的发病率正以年均2%的速度上升。近年的流行病学资料显示，大肠癌已上升为全球第三位最常见的癌症，2000年全世界有70万人患大肠癌，其中50万人因此而死亡。在欧美发达国家其发病率居恶性肿瘤的第二位。在中国过去其发病率一般在第五、六位左右，从近年流行趋势来看，世界范围内发病患者数在逐年上升。在我国，随着人们生活方式及饮食习惯的改变，发病患者数也在增加，尤其是在北京、上海等发达的城市或地区。据北京市肿瘤防治研究所资料显示，目前北京市每年新增癌症患者约2万名，发病率为179/10万，其中结肠癌位居第二位。据上海地区调查显示，我国肠癌发病率的增速是世界平均水平的两倍。所以，肠癌的防治已刻不容缓。肝癌即肝脏恶性肿瘤，可分为原发性和继发性两大类。原发性肝脏恶性肿瘤起源于肝脏的上皮或间叶组织，前者称为原发性肝癌，是我国高发的，危害极大的恶性肿瘤；后者称为肉瘤，与原发性肝癌相比较较为少见。继发性或称转移性肝癌系指全身多个器官起源的恶性肿瘤侵犯至肝脏。一般多见于胃、胆道、胰腺、结直肠、卵巢、子宫、肺、乳腺等器官恶性肿瘤的肝转移。原发性肝癌的病因及确切分子机制尚不完全清楚，目前认为其发病是多因素、多步骤的复杂过程，受环境和因此双重因素影响。流行病学及实验研究资料表明，乙型肝炎病毒（HBV）和丙型肝炎病毒（HCV）感染、黄曲霉素、饮水污染、酒精、肝硬化、性激素、亚硝胺类物质、微量元素等都与肝癌发病相关。继发性肝癌（转移性肝癌）可通过不同途径，如随血液、淋巴液转移或直接侵润肝脏而形成疾病。近年来，随着靶向药物的问世，给广大癌症患者带来了新希望。但是，目前问世的靶向药物往往价格高昂，难以为广大人们群众所承受。因此，找寻新的癌症发生的关键蛋白是癌症研究的热点和重点。近年来，有研究发现：MK2在多种实体癌症中存在高表达、高活性，且与癌症的发生、发展、转移和侵袭等密切相关。另有文献显示，MK2抑制剂与易瑞沙等EGFR靶向药物联合使用，可有效改善肺癌的EGFR耐药现象。所以，本论文拟通过GENEBANK数据库找寻MK2的基因序列；以肺癌A549细胞为材料，提取RNA，反转录cDNA，PCR扩增MK2全，长连接T载体，经双酶切和测序验证后，亚克隆至pET-32a表达载体中，转化BL21菌株，提取蛋白，SDS-PAGE验证目的蛋白的表达与否。
2. 研究内容和预期目标
近年来，有研究发现：MK2在多种实体癌症中存在高表达、高活性，且与癌症的发生、发展、转移和侵袭等密切相关。另有文献显示，MK2抑制剂与易瑞沙等EGFR靶向药物联合使用，可有效改善肺癌的EGFR耐药现象。所以，本论文拟通过GENEBANK数据库找寻MK2的基因序列；以肺癌A549细胞为材料，提取RNA，反转录cDNA，PCR扩增MK2全，长连接T载体，经双酶切和测序验证后，亚克隆至pET-32a表达载体中，转化BL21菌株，提取蛋白，SDS-PAGE验证目的蛋白的表达与否。
3. 研究的方法与步骤
a. 1. 通过检索gennbank数据库，查找mk2基因序列；
b. 2. 培养a549细胞，提取rna，反转录为cdna。
c. 3. pcr扩增mk2基因全长，连接t载体，双酶切和测序验证。
4. 参考文献
1. beswick e j, morris k t. inhibition of mk2 in the treatment of cancer:, wo 2016032882 a1[p]. 2016.
2. 2. ray a l, castillo e f, morris k t, et al. blockade of mk2 is protective in inflammation‐associated colorectal cancer development[j]. international journal of cancer, 2016, 138(3):770-775.
3. 3. johanna s e, vidar s, aage h, et al. loss ofmkk3andmk2copy numbers in non-small cell lung cancer:[j]. journal of cancer, 2016, 7(5):512-515.
5. 计划与进度安排
2022-2022-1学期第17-20周-2022-2022-2学期第1-4周（2022.11.25-2022.03.31）查阅文献，完成开题报告的撰写。找寻mk2基因序列；
第5-6周（2022.04.01-2022.04.15）设计引物，扩增mk2基因全长；
第7-8周（2022.04.16-2022.04.29）连接t载体，双酶切和测序验证；
