1. 研究目的与意义
香烟中含有害化学物质3 000余种，致癌物质30多种，每年都有近百万人死于与吸烟相关疾病，癌症尤其是肺癌与香烟毒性密切相关。尼古丁是香烟及烟雾中的主要毒物成分，常温下为无色或浅黄色油状液滴，极易溶于酒精。尼古丁是吸烟致瘾的主要物质，具有兴奋中枢和提神作用。进入人体后，会产生四肢末梢血管收缩、呼吸心跳加快、血压升高、精神状况改变，同时也是造成高血压、中风等心血管性疾病的主要帮凶。吸烟增加患肺癌的风险已在流行病学、细胞遗传学、分子遗传学等方面得到了广泛的证实。自从致癌性与致突变性之间的密切关系得到证实以来，许多学者用ames试验来研究香烟烟雾的致癌作用。近年来又有学者运用染色体畸变和姐妹染色单体交换技术来研究香烟的致突变作用，或使用小鼠外周血淋巴细胞微核技术研究香烟凝结物的致突变作用，但后者并没有得到阳性的结果。直到1995年嵇庆等人运用蚕豆微核技术，从而验证了香烟烟雾水溶物对蚕豆根尖细胞微核有明显的诱变作用。李桂芳等人也验证了烟草浸提液会导致蚕豆根尖遗传损伤。然而上述学者都是运用香烟水溶物来进行实验，溶液中的其他杂质也可能有类似的毒理作用，因而本课题将用以不同方式得到的香烟提取物进行蚕豆微核试验，从而验证尼古丁的毒性作用。
微核（micronucleus,简称mcn）是位于生物细胞的细胞质中独立于主核，直径小于主核的1/20~1/3，完全与主核分开的圆形或椭圆形微小核。微核是由于各种有害物质如重金属、电离辐射、烟焦油、各种污染物、细菌毒素等损伤使染色体发生断裂，细胞进入下一次分裂时，染色体不能随有丝分裂进入子细胞，而导致染色体的丢失和断裂，从而形成一个或数个小核。例如过量的锌离子会干扰g1期蛋白质的合成，使细胞在g1期停滞，甚至不能进入分裂状态，最终也会导致微核的产生。有些研究者认为，微核可以是细胞凋亡的产物，当致畸因素导致凋亡基因激活，内切酶激活，切割dna，形成细胞核碎片，最终导致产生许多微核。
微核的形成是细胞受遗传毒物作用后的一种遗传学终点，以观察细胞中微核的形成来检测遗传毒物，称为微核试验。微核试验是以动植物为材料，利用细胞生物学方法观察其出现的微核率( micronucleus frequency，mnf) 来表示材料受遗传损伤程度的一种检测遗传毒物的方法。微核试验创建于20 世纪80 年代，目前许多国家和国际组织已将其规定为新药、食品添加剂、农药、化妆品等毒理安全性评价的必做试验。近年来，随着分子生物学技术的迅速发展，大大拓展了微核试验的检测和应用范围，已发展成为能同时检测染色体断裂、丢失、分裂延迟、不分离、dna 损伤修复障碍、hprt 基因突变、凋亡、细胞分裂不平衡等多种遗传终点,因而近年来国际上有人提出了新微核试验的概念， 从而使微核试验焕发出新的生机。
2. 研究内容和预期目标
工作内容：
1、香烟样品确定和有害成分提取。
2. 蚕豆微核技术考查不同样品的诱变作用。
3. 研究的方法与步骤
研究方法：采用蚕豆根尖细胞微核检测技术，探讨香烟浸提液和索氏提取法提取的尼古丁对蚕豆根尖细胞微核率的影响情况，从而得出香烟样品的遗传毒性的影响强度，验证香烟对人体的危害。
研究步骤：实验主要包括香烟的提取方法（香烟浸提液和索氏提取法），蚕豆根尖的培养，微核的诱变处理、恢复培养、根尖细胞的固定、酸解、染色压片等步骤，观察不同细胞的染色体情况，统计微核数目并进行微核率的计算。
4. 参考文献
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5. 计划与进度安排
| 2017年11月20日---2018年2月28日：确定论文选题，了解蚕豆微核技术的相关知识。 2018年3月5日---2018年3月11日（第一周）：接受任务书，与指导教师见面，就确定开题报告的重点和注意点，查阅相关文献。 2018年3月12日---2018年3月18日（第二周）：梳理归纳相关文献要点，勾勒实验大致思路，并与指导老师交流确认。 2018年3月19日---2018年3月25日（第三周）：综合相关文献资料，撰写开题报告。 2018年3月5日---2018年4月1日（第四周）：与指导老师交流开题报告存在的问题，修改完善并提交。制作开题课件。 2018年4月2日---2018年4月8日（第五周）：设计实验方案，准备实验材料，进行预实验。与老师进行交流，对正式实验进行一些完善和补充。 2018年4月9日---2018年4月29日（第六—八周）：香烟成分提取方法的选择、确定和收集.确定处理蚕豆根尖细胞的方法并进行优化。蚕豆根尖细胞微核技术对香烟的诱变实验。记录数据。 2018年4月30日---2018年5月13日（第九—十周）：检查实验过程，发现错误及时补救。若无错误可以着手准备外文资料的翻译。 2018年5月14日---2018年5月20日（第十一周）：整理前几周的实验数据，进行整体分析，确定所选样品遗传毒性的影响程度。与老师就实验结果进行交流。 2018年5月21日---2018年6月10日（第十二—十四周）： 撰写论文，毕业论文工作相关资料的完善，再次与老师确定论文的相关问题，修改。 2018年6月11日---2018年6月15日（第十五周）：及时提交论文及相关资料，包括定稿、英文翻译、原始数据记录本等。参加毕业论文答辩。
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