1. 研究目的与意义
有机溶剂有严重破坏微生物正常生理功能的毒害作用，而细胞膜是溶剂毒性作用的主要靶点。1989年，关于菌种Pseudomonas putida的有机溶剂耐受现象的报道，开辟了人们对有机溶剂耐受机制理解的纪元。耐有机溶剂微生物是一类新颖的极端微生物，它们通过各种耐受机制，有效抵御或降低有机溶剂对其细胞产生的毒害作用，机制包括：囊泡外排、改变细胞膜磷脂结构组成、有机溶剂外排泵、改变细胞比表面积等，而其中以有机溶剂外排机制为最重要。在恶臭假单胞菌中存在的有机溶剂外排泵主要有：TtgABC、TtgDEF、TtgGHI，它们被各自的调节蛋白所调节。其中TtgABC的阻遏蛋白是TtgR，TtgDEF的阻遏蛋白是TtgT，TtgGHI的阻遏蛋白是TtgV。在同时含有TtgGHI和TtgDEF的细胞中，调节蛋白TtgV和TtgT共同调节外排泵TtgGHI和TtgDEF的表达。调节蛋白TtgV可以被诱导表达，而调节蛋白TtgT是组成型表达。有文献报道外排泵泵TtgGHI可以被有机溶剂如甲苯诱导。在甲苯存在时，外排泵TtgGHI的表达上调，但同时也观察到外排泵TtgABC的表达下调，这说明它们之间的调控存在着某种联系，而这势必与它们的功能有关。研究发现在当外排泵TtgABC被失活以后，外排泵TtgGHI的调节蛋白TtgV会发生突变，本论文旨在研究调节蛋白TtgV的突变情况。包括突变率和突变的机制等。
目的、意义：
对调节蛋白TtgV的研究，可以增加对该调节蛋白的认识，同时有助于了解外排泵TtgABC和TtgGHI的功能上的联系。2. 研究内容和预期目标
研究内容：
1.调节蛋白ttgv的突变率。
2.调节蛋白ttgv的突变方式。
3. 研究的方法与步骤
方法与步骤：
1. 活化菌株，涂布在含有氨苄的LB平板上，计数细胞。同时将细胞涂布在LB平板上，计数总细胞数。根据两平板的细胞数，计数出突变率。
2. 挑取突变细胞，PCR扩增ttgV，送产物去测序，根据测序结果与已知的ttgV序列比较分析突变类型。4. 参考文献
1.aravalli, n. r. growth of gram-negative bacteriain the presence of organic solvents. enzym. microb. tech. 1996.19:606-613.
2. fillet, s., c. daniels, et al. (2012)."transcriptional control of the main aromatic hydrocarbon efflux pump inpseudomonas." environmental microbiology reports 4(2): 158-167.
3.inoue, a. and k. horikoshi. a pseudomonasputida thrives in high concentrations of toluene. nature. 1989. 338:264-266.
5. 计划与进度安排
1. 2022年12月25日—2022年3月9日 参阅参考文献制定具体的实验方案。准备实验药品和器具，未使用过的仪器学会正确操作使用。
2. 第1周 2022.3.5—3.11 接受任务书，与指导教师见面，就课题确定开题报告的重点和注意点，查阅相关文献。
3. 第2周—第4周 2022.3.12—3.30 梳理归纳相关文献要点，了解实验目的与意义，明确整理实验思路。综合相关文献资料，撰写开题报告。
