1. 研究目的与意义
酵母是一些单细胞真菌，并非系统演化分类的单元。是子囊菌、担子菌等几科单细胞真菌的通称，一般泛指能发酵糖类的各种单细胞真菌，可用于酿造生产，有的为致病菌，是遗传工程和细胞周期研究的模式生物。酵母菌是人类文明史中被应用得最早的微生物。可在缺氧环境中生存。目前已知有1000多种酵母，根据酵母菌产生孢子（子囊孢子和担孢子）的能力，可将酵母分成三类：形成孢子的株系属于子囊菌和担子菌。不形成孢子但主要通过出芽生殖来繁殖的称为不完全真菌，或者叫“假酵母”（类酵母）。目前已知极少部分酵母被分类到子囊菌门。酵母菌在自然界分布广泛，主要生长在偏酸性的潮湿的含糖环境中，而在酿酒中，它也十分重要。本试验主要利用蛋白质重组技术将泛素蛋白Urm基因插入到氨苄青霉素抗性的质粒中，然后对蛋白质进行体外表达并纯化的过程，因此本试验的内容主要包括一下几个方面： 目标基因的扩增，酶切 ；目标基因插入到载体中 ；目标基因的表达 ；目标蛋白的纯化。有目的的将一个个体细胞内的遗传基因转移到另一个不同性状的个体细胞内DNA分子,使之发生遗传变异的过程。来自供体的目的基因被转入受体细菌后,可进行基因产物的表达,从而获得用一般方法难以获得的产品,如胰岛素、干扰素、乙型肝炎疫苗等是通过以相应基因与大肠杆菌或酵母菌的基因重组而大量生产的。
2. 研究内容和预期目标
本实验属于分子生物学中的基因重组内容，实验包括目标基因的获取以及目标基因的扩增和重组表达，因此具体可以概括为以下几个方面的内容：1.查找文献，确定酵母细胞中所要研究的蛋白序列2.根据蛋白序列和所需要的载体序列设计蛋白质的引物序列3.提取酵母基因组，利用酵母基因组进行目标序列的扩增4.纯化目标序列，将目标序列插入载体中5.将重组的质粒转入到大肠杆菌中进行表达
3. 研究的方法与步骤
一:目的基因的提取
酵母菌基因组dna的提取所需试剂： se缓冲液（1m山梨醇，0.1medta ph7.5）；溶菌酶（50mg/ml）；20％pvp；蛋白酶k缓冲液（10mm tris ph7.6 0.5% sds 1mm edta）；
酵母菌基因组dna的提取实验的操作过程
4. 参考文献
1.wang f, liu m, qiu r, ji c. the dual role of ubiquitin-like protein urm1 as a protein modifier and sulfur carrier. protein cell. 2011 aug;2(8):612-9.
2.zhang w, zhang j, xu c, wang t, zhang x, tu x. solution structure of urm1 from trypanosoma brucei. proteins. 2009 may 15;75(3):781-5
3.van der veen ag, schorpp k, schlieker c, buti l, damon jr, spooner e, ploegh hl, jentsch s.role of the ubiquitin-like protein urm1as a noncanonical lysine-directed protein modifier.proc natl acad sci u s a. 2011 feb 1;108(5):1763-70.
5. 计划与进度安排
本试验主要利用蛋白质重组技术将泛素蛋白Urm基因插入到氨苄青霉素抗性的质粒中，然后对蛋白质进行体外表达并纯化的过程，因此本试验的内容主要包括一下几个方面： 目标基因的扩增，酶切 ；目标基因插入到载体中 ；目标基因的表达 ；目标蛋白的纯化 。
因此根据本试验的内容，我们安排一下实验进度： 3月2号-3月30号 目标基因的扩增，酶切，插入及检验4月1号-4月15号目标基因的蛋白表达及检验4月16号-4月30号目标蛋白的纯化5月1号-6月1日数据整理及毕业论文的撰写
