酵母中泛素化E2酶Ubc9的质粒构建开题报告

 2022-02-27 21:14:03

1. 研究目的与意义

细胞内存在多种蛋白质共价修饰方式,泛素化是其中一种,它对蛋白质发挥正常的生物学功能起着重要的作用。

ubc9作为唯一一种e2酶,他对生物过程至关重要。

本课题研究酵母中泛素化e2酶ubc9的质粒构建,sumo化依赖ubc9的表达,他在恶性肿瘤中的表达可以作为临床医学的诊断依据。

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2. 研究内容和预期目标

本实验属于分子生物学中的基因重组内容,实验包括目标基因的获取以及目标基因的扩增和重组表达,因此具体可以概括为以下几个方面的内容:首先确定蛋白序列并且设计好相应的引物,其次利用酵母的基因组进行目标扩增,然后纯化得到的目标序列,插入到载体中,最后将其移植到大肠杆菌中进行表达即可。

预期目标:1.确定所需要研究的蛋白序列并且设计好所需要的载体序列和引物序列

2.提取相应的酵母基因组,利用酵母基因组进行目标序列扩增

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3. 研究的方法与步骤

研究方法:利用pcr扩增并获取目的基因,定向插入到载体中,形成载体质粒。

1.ubc9的扩增以及扩增产物的回收。

2.载体质粒的扩增和载体质粒的提取。

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4. 参考文献

1.wilson vg. viral interplay with the host sumoylation system. adv exp med biol. 2017

2.lee js,choi hj,baek sh. sumoylation and its contribution to cancer. adv exp med biol. 2017

3.deyrieux af ,wilson vg. sumoylation in development and differentiation.adv exp med biol. 2017 。

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5. 计划与进度安排

3月2号-3月30号 目标基因的扩增,酶切,插入及检验

4月1号-4月15号目标基因的蛋白表达及检验

4月16号-4月30号目标蛋白的纯化

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