1. 研究目的与意义
酶是具有催化功能的蛋白质，其催化的多样性已使其在生物产业中得到广泛应用。
应用自然界酶分子进化原理，构建具有实际应用所需的高催化效率、高稳定性的酶是蛋白质工程研究的重要目标。
随着人们对酶的三级结构了解的加深，越来越多的合理设计方法，比如蛋白质结构域重组，被用来改变酶的功能和性质。
2. 研究内容和预期目标
1. 对外源基因的确定及目的基因的设计。
2．对目的基因的扩增，同时实现质粒的插入及纯化，并进行检测和验证。
3. 实现人类蛋白lish结构域的重组，确保目的基因能够在蛋白质中得以表白，并对其进行测序。
3. 研究的方法与步骤
研究方法：涂平板法培养菌，感受态的制备与转化-氯化钙法，DNA凝胶电泳法，PCR扩增目的基因，质粒和目的基因进行双酶切，质粒抽提后把质粒导入感受态细胞进行转化，蛋白质的检测-SDS-PAGE检测，目的蛋白纯化，酸水解法进行蛋白质测序。
实验步骤：1.菌种培养及活化2.摇菌，进行质粒抽提-PET-22B质粒3.引物设计，并使用PCR技术扩增目的基因4.DNA凝胶电泳，及胶回收5.对PET-22B质粒和MSRB进行双酶切过程，产物进行胶回收，再进行检测，最后连接多个酶切片段，构建新的质粒6.氯化钙法进行感受态的制备与转化7.将构建好的新的质粒导入感受态细胞实现转化8.检测MSRB蛋白的表达，使用SDS-PAGE检测法9.对蛋白进行纯化10.蛋白质的测序11.整理实验数据，进行数据分析
4. 参考文献
【1】单斌，陈瑞，细菌质粒提取方法的研究【J】.昆明医学院学报，2001，22(1):42-44.【2】马大龙，劳者歌，孙英.高校表达非融合蛋白的大肠杆菌质粒载体的构建【J】.北京大学学报（医学版），1990，2.【3】蛋白质纯化技术及应用【M】.化学工业出版社，2005.【4】李彦姝，王春雨，苏楠，等. phyA基因新型载体的构建及其在大肠杆菌中的高效表达【J】.中国生物工程杂志，2005，25(1):70-75.【5】张红艳，李彦姝，姚远，等. pGEX-5X-1-hLMO4原核质粒构建及重组蛋白表达【J】.东南大学报：医学版，2012，31(2):139-143.【6】温凤云，屈艳丽，于洪. CD146基因重组质粒的构建及蛋白表达【J】.解剖科学进展，2012，18(003):205-207.【7】蛋白质纯化技术及应用【M】. 化学工业出版社，2005.【8】Journal of cell science,2010,123(14):2391-2401.
5. 计划与进度安排
开始：2022年3月1日1、第1-2周：查阅文献，设计方案2、第3周：实验前期准备3、第4-5周：受体菌培养4、第6周：菌种活化5、第7-8周：制作感受态，质粒抽提6、第9-10周：目的基因导入、扩增7、第11-12周：表达、纯化、测序8、第13-15周：论文撰写
