土壤高产脂肪酶菌株的筛选和表征开题报告

1. 研究目的与意义

脂肪酶(lipase，ec3．1．1．3)，又称为三羧酸甘油酯水解酶，是重要的酯键水解酶。主要催化分解各种天然脂质，能将甘油三酯催化水解为甘油和脂肪酸。脂肪酶广泛应用于生物能源、食品、化工合成、医药等领域。在微生物界，脂肪酶分布广泛，大多数的微生物都能产生脂肪酶。微生物中的脂肪酶含量尤为丰富，其来源一般都是分泌性的胞外酶，相比动植物，其具有更广的作用温度范围、作用ph范围以及高度的底物专一性和立体选择性。

土壤中蕴含丰富的微生物资源，脂肪酶在微生物中分布广泛，从微生物中筛选出具有新特性和高活力的脂肪酶，是一项非常有意义的工作。目前对细菌脂肪酶研究较少，对于潜在的应用价值和巨大的市场需求，寻找脂肪酶和新酶种的工业化研究，有十分现实的探究意义。从自然界中筛选脂肪酶产生菌，得到的野生型菌株，其脂肪酶基因大多都受到宿主菌的调控，脂肪酶表达产量很低，难以满足脂肪酶的大规模工业生产。

2. 研究内容和预期目标

土壤可作为一个巨大的天然微生物库，这些微生物在自然界的进化中形成了独特的性质和催化能力。绝多数的化学反应中所需的酶类催化剂，都可以在土壤微生物中发现。土壤微生物易于培养，作为工业开发时，利用廉价易得的复合培养基，可以对土壤微生物进行大规模筛选、培养和长期保藏。简便易行，经济环保。自然界中中的生物，无时无刻不在进行着天然筛选，这也形成了不同土壤中微生物所产脂肪酶性能，如稳定性、活力、底物耐受性和选择性等千差万别，因此对土壤中的微生物进行详尽的筛选，发现性能更加优良的菌种，是很有必要的。

对于土壤微生物的筛选是本论文第一部分研究工作的重点。用生物发酵培养的方法对土壤产脂肪酶进行筛选。首先，找到富含目的菌株的土壤，经过初筛和复筛后，选择最优菌株。第二章对筛选出的菌株经行了初步鉴定，可以判断出属于革兰氏阳性还是革兰氏阴性。最后对酶活力最高的菌株进行优化培养，筛选出最优发酵培养基组成，以期为扩大发酵规模提供资料。

3. 研究的方法与步骤

由于产脂肪酶菌株广泛存在与土壤微生物中，实验开始，选择富含目的菌株的土壤，用透明圈法进行初筛。将含有目的菌株的土壤培养液涂布在含有橄榄油的固体培养基上，培养48h后，观察平板上的透明圈。有透明圈出现的地方，即是，目的菌株产脂肪酶菌。初筛出来的目的菌株，接种环挑单菌落到富集培养基上，进行富集培养。

对筛选出来的菌株，用革兰氏染色法，进行染色，初步鉴定菌株的种类。

4. 参考文献

[1]m.kamal,n.iimura,t.nabekura,s.kitagawa,chem.pharm.bull.54(2006)481.

[2]m.minato,t.kaneko,s.masauji,t.ito,j.organomet.chem.691(2006)2483.

[3]z.schelz,j.molnar,j.hohmann,fitoterapia77(2006)279.

5. 计划与进度安排

1、2016年3月1日~2022年3月18日，了解实验目的，熟悉流程步骤，查阅相关资料，翻译文献资料，撰写绪论，；

2、2016年3月19日~2022年3月25日，准备实验所需药品，采集实验所需的土壤样品。