1. 研究目的与意义
白灵菇又名翅鲍菇、百灵芝菇、雪山灵芝、鲍鱼菇。其肉质细嫩，味美可口，具有较高的食用价值，被誉为“草原上的牛肝菌”和侧耳，颇受消费者的青睐。白灵菇营养丰富，据科学测定，其蛋白质含量占平菇的20%，含有17种氨基酸，多种维生素和无机盐。白灵菇还具有一定的医药价值，有消积、杀虫、镇咳、消炎和防治妇科阴道肿瘤等功效。白灵菇的药用价值很高，它含有真菌多糖和维生素等生理活性物质及多种矿物质，具有调节人体生理平衡，增强人体免疫功能的作用。因之野生条件十分恶劣加之过度采摘野生数量十分稀少。
一、不同碳源对白灵菇母种生长的影响。以菌丝萌发时间、菌丝日长速和菌丝密度等为测量指标，通过单因子实验比较白灵菇菌丝体对不同碳源的利用情况，选择最适碳源。
二、不同氮源对菌丝体生长的影响。通过单因子实验比较白灵菇菌丝体对不同氮源的利用情况选择最适氮源，测量指标同上。
2. 研究内容和预期目标
主要研究内容：本实验通过碳源实验、氮源实验、无机盐实验、维生素实验和四因素三水平的正交实验对白灵菇菌丝的营养特性进行了研究，就白灵菇菌丝的日生长速度，菌丝色泽，菌落边缘，菌丝密度，气生菌丝量和菌丝密度这五个方面研究了白灵菇菌丝对不同营养源的利用情况，同时采用重复处理，使实验更加全面，合理。
菌丝长势:观察菌丝色泽，菌丝稠密,菌落边缘整齐度,气生菌丝量的多少。
菌丝长速:观测菌丝日平均生长速。
3. 研究的方法与步骤
1母种活化培养基
a.母种活化培养基的配制（PDA培养基）
称取200克马铃薯，去皮，切成不规则的小块，加入少量蒸馏水于电炉上煮沸，持续沸腾30分钟，边加热边用玻璃棒搅拌，停止加热后，自然冷却，用二层纱布过滤。取滤液，倒去马铃薯碎块。用电子天平称取琼脂20克，葡萄糖20克，KH2PO41g，MgSO40.5g，VB10.1g加入滤液中，加蒸馏水定容到1000ml，pH值调为6.0。边加热边搅拌至完全溶解。
b.白灵菇菌种活化培养
待培养基自然冷却到50℃左右即可分装在3个500ml的三角瓶内，瓶口塞上棉塞，用牛皮纸包扎好，与已经清洗干净并已用牛皮纸包扎好的6对培养皿一起放入手提式蒸汽消毒器内。高温（115.6℃，30分钟）灭菌后，准备好75%的消毒酒精、酒精灯、火材、保鲜膜，将灭菌后的培养基、锥形瓶、培养皿和打孔器一同放置在洁净工作台上用紫外灯照射15分钟后，打开照明灯和通气口，将培养基倒入培养皿内，每个培养皿倒入20ml培养基。用打孔器取相同大小的母种，接种到各个培养基上，用保鲜膜封好培养皿的缝隙，倒置放入25℃恒温箱内，活化培养10天。待菌丝铺满培养皿表面即可取出放入冰箱低温保存以待后用。
2碳源实验
a.碳源实验培养基的制备
首先称取琼脂20克，NH4NO33g，KH2PO40.1g,MgSO4.7H2O1g,加入烧杯中，加蒸馏水定容到1000ml。边加热边搅拌至完全溶解。
b.碳源实验方法
待培养基自然冷却至50℃左右时分装在6个250ml的三角锥型瓶中，每瓶100ml，分别加入葡萄糖，可溶性淀粉，蔗糖，乳糖，玉米粉，小麦粉各5克，并用标签作好标记，加热溶解，冷却后pH值调为6.0。高温（115.6℃）灭菌30分钟后，在洁净工作台上进行无菌操作，工作台先紫外灯照射15分钟后，用75%的酒精消毒手和桌面才可进行操作。将6个锥形瓶内的培养基分别倒入贴好相应标签的培养皿中，每皿20ml；用打孔器取相同大小的母种，接种到各个培养基上，用保鲜膜包裹周边缝隙，记录编号。每种培养基配方设置三个重复，倒置于25℃培养箱恒温培养。每24小时测量菌丝的生长情况，并作好记录，分析时做LSD差异显著性检验。
3氮源实验
a.氮源实验培养基的制备
首先称取碳源实验筛选出的最佳碳源50g，琼脂20克，KH2PO41g,MgSO4.7H2O1g,加入烧杯中，加蒸馏水定容到1000ml。边加热边搅拌至完全溶解。
b.氮源实验方法[8，9]
待上述基础培养基自然冷却至50℃左右时，分装在7个250ml的三角锥型瓶中，每瓶100ml，分别加入硝酸铵，硝酸钾，氯化铵，硫酸铵，尿素，酵母膏，蛋白胨各0.3g，并用标签作好标记，加热溶解，pH值调为6.0。高温（115.6℃）灭菌30分钟后，在洁净工作台上进行菌种移植，将7种不同氮源的培养基分装在培养皿中，每皿20ml；用打孔器取相同大小的母种，接种到各个培养基上用保鲜膜包裹周边缝隙，记录编号，每种培养基配方设置三个重复，在25℃恒温培养。每24小时测量菌丝的生长情况，并作好记录，分析时做LSD差异显著性检验。
4无机盐实验
a.无机盐实验培养基的制备
用电子天平称取琼脂20克，最佳碳源50克，最佳氮源3克，加入烧杯中，加蒸馏水定容到1000ml，边加热边搅拌至完全溶解。
b.无机盐实验方法
培养基自然冷却至50℃左右时分装在7个250ml的三角锥型瓶中，每瓶100ml，分别加入磷酸二氢钾，硫酸锰，硫酸镁，硫酸铜，硫酸亚铁，氯化钾，氯化钠各0.1g，并用标签作好标记，加热溶解，pH值调为6.0。高温（115.6℃）灭菌30分钟后，在无菌室进行无菌操作，将7个锥形瓶内不同无机盐培养基分装在培养皿中，每皿20ml；用打孔器取相同大小的母种，接种到各个培养基上，用保鲜膜包裹周边缝隙，记录编号，每种培养基配方设置三个重复，在25℃培养箱内恒温培养。每24小时测量菌丝的生长情况，并作好记录，分析时做LSD差异显著性检验。
5维生素实验
a.维生素实验培养基的制备
首先称取最佳碳源50克，最佳氮源3克，最适无机盐1克，琼脂20克，加蒸馏水定容到1000ml，边加热边搅拌至完全溶解。
b.维生素实验过程
待培养基自然冷却至50℃左右时分装在4个250ml的三角锥型瓶中，每瓶100ml，用电子天平称取VB1,VB2,VB6,复合型维生素B各0.03g。分别加入四个锥形瓶中，pH值调为6.0。高温（115.6℃）灭菌后，在无菌室进行无菌操作，将不同维生素培养基分装在培养皿中，每皿20ml；用打孔器取相同大小的母种，接种到各个培养基上用保鲜膜包裹周边缝隙，记录编号，每种培养基配方设置三个重复，在25℃培养箱恒温培养。每24小时测量菌丝的生长情况，并作好记录，分析时做LSD差异显著性检验。
6L9(3)4正交实验
根据碳源实验、氮源实验，无机盐实验以及维生素实验的结果，设计了一个四因素三水平的正交实验，以此来确定猴头菇的最适碳源“玉米粉”与最适合氮源“酵母膏”，最适无机盐“磷酸二氢钾”，最适维生素“复合维生素”的最佳浓度组合，以得出猴头菇菌丝生长的最适营养条件。因素水平设计见表1，表2
表1.正交实验因素水平表（单位%）
| 水平 | 玉米粉（A） | 酵母膏（B） | 磷酸二氢钾（C） | 复合VB（D） |
| 1 2 3 | 4 5 6 | 0.2 0.3 0.4 | 0.05 0.10 0.15 | 0.02 0.03 0.04 |
表2.正交实验因素水平表（单位%）
| 试验号i | 玉米粉（A） | 酵母膏(B) | 磷酸二氢钾(C) | 复合VB（D） |
| 1 | 4 | 0.2 | 0.05 | 0.02 |
| 2 | 4 | 0.3 | 0.10 | 0.03 |
| 3 | 4 | 0.4 | 0.15 | 0.04 |
| 4 | 5 | 0.2 | 0.15 | 0.03 |
| 5 | 5 | 0.3 | 0.05 | 0.04 |
| 6 | 5 | 0.4 | 0.10 | 0.02 |
| 7 | 6 | 0.2 | 0.10 | 0.04 |
| 8 | 6 | 0.3 | 0.15 | 0.02 |
| 9 | 6 | 0.4 | 0.05 | 0.03 |
按照表2所列培养基配方配制培养基，并分别加入2%琼脂，加热搅拌至完全溶解，调pH为6.0，待培养基自然冷却到50℃左右即可分装在9个250ml的三角瓶内，每瓶100ml，瓶口塞上棉塞，用牛皮纸包扎好，与已经清洗干净并已用牛皮纸包扎好的27对培养皿一起放入手提式蒸汽消毒器内。高温（115.6℃，30分钟）灭菌后，准备好75%的消毒酒精、酒精灯、火材、保鲜膜，将灭菌后的培养基、锥形瓶、培养皿和打孔器一同放置在洁净工作台上用紫外灯照射30分钟后，打开照明灯和通气口，将培养基倒入培养皿内，每个培养皿倒入20ml培养基。用打孔器取相同大小的菌种，接种到各个培养基上，用保鲜膜封好培养皿的缝隙，倒置放入25℃恒温箱内，每24小时测量菌丝的生长情况，菌丝色泽、菌落边缘和菌丝密度。并作好记录，分析时做LSD差异显著性检验。
4. 参考文献
[1]李宏，张敏，刘俊杰.宾王菇母种培养基的优化研究初报[j].食用菌，2010,
1:37-38.
[2]陈欢，刘岩，王伟功.大球盖菇母种培养基的研究[j].北方园艺,2011,6:178-179
5. 计划与进度安排
第3周前：查阅相关文献资料并设计实验方案，完成开题报告；
第4-5周：查阅参考文献，并进行实验的前期准备工作；
第6-7周：碳源实验；
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