1. 研究目的与意义
黄酮类化合物是一种广泛存在与自然的天然产物,天然的黄酮类化合物在预防及控制癌症、糖尿病和心血管疾病等现代常见疾病方面具有显著的功效,其中抗肿瘤活性是目前的研究热点之一。大量研究已证实黄酮类化合物在肺癌、结直肠癌、前列腺癌、乳腺癌、胰腺癌等的治疗和预防中均相当重要,逐渐成为研究热点。
从植物中提取的天然产物在肿瘤化学治疗中占据着很重要的地位。然而,这些化疗药在杀肿瘤细胞的同时,对正常细胞也有很强的杀伤性。因此,能够选择性作用于肿瘤细胞,而对正常细胞毒性较小的化合物,对于肿瘤的治疗意义重大。
2. 国内外研究现状分析
凋亡是清除肿瘤细胞的一个主要机制,它不会给正常的细胞或周边组织带来损伤。对凋亡的认识为有效的靶向治疗诱导细胞死亡或使肿瘤细胞对化疗药物敏感提供了理论基础。哺乳动物细胞的凋亡主要分为两个途径:一是线粒体介导的内源性通路;另一个是死亡受体介导的外源性通路。此外,内质网应激反应同样能够导致凋亡。在线粒体凋亡通路中,细胞色素c会从线粒体释放到胞浆,进而启动caspase 级联活化反应。caspase 家族蛋白的活化是凋亡中的关键步骤。细胞色素c 与apaf-1 的结合对于caspase 9在胞浆的活化是必须的,caspase 8 是死亡受体凋亡通路的一个关键启动caspase蛋白,当有配体结合时,caspase 蛋白可以发生剪切。caspase 4 似乎只有当发生内质网应激时才会被剪切并活化。靶向恶变前或者恶性肿瘤细胞中的凋亡通路是一个有效的肿瘤预防和治疗策略。
pi3k/akt 信号通路是人类肿瘤中,最常见的被活化的通路,可以造成凋亡抵抗。pdk1 可以将akt 的308 位thr 磷酸化,mtor-rictor复合体可以将akt 的473 位ser 磷酸化,473 位的磷酸化对于akt 的最大程度的活化是必须的。akt 不仅可以抑制凋亡,也是促进增殖信号的关键分子。因此,akt 通路是很有吸引力的一个抗肿瘤作用靶点。
研究表明,桂花中富含黄酮类物质,并具有抗肿瘤活性,不过,桂花中黄酮类物质抑制人类肿瘤的作用机制至今还没有阐明。项目以典型品系的桂花为原料提取出了黄酮类物质,着重探讨了桂花黄酮类物质杀人肝癌细胞、阻止其恶性进展的作用机制。
3. 研究的基本内容与计划
实验方案及计划
2016.2上旬:阅读指定文献,对实验方法及内容进行了解并撰写文献综述;
2016.2下旬:细胞培养、mtt 法检测细胞增殖、免疫印迹分析;
4. 研究创新点
1、研究桂花黄酮类物质对人肝癌细胞HepG 2增殖和侵袭的抑制,并考察对人肝癌细胞粘附、迁移和浸润能力的影响;
2、通过免疫印迹分析、免疫共沉淀、细胞免疫荧光和质粒提取与转染,研究桂花黄酮类物质促进乳腺癌细胞凋亡的分子机制,讨论AKT 信号通路对于桂花黄酮类物质诱导的凋亡的影响。