4-乙烯基愈创木酚双加氧酶在大肠杆菌中的表达和特性研究开题报告

化学式c9h10o2。

1980年在茶叶中检出。

2. 国内外研究现状分析

李改丽等以及古春芳等都研究过 CO X-2 蛋白片段的原核表达 , 但研究的是 CO X-2 基因的 N 端或C 断的部分片段 , 尚未见其全基因的原核表达。

2005 年 陈 涛 等 人 对 筛 选 到 的 产 PLC 菌 株Bacillus cereus Shenzhen 754-1 进行 3 次紫外线和两次 Co60-γ 射线 诱 变 处 理， 选 出 3 株 高 酶 活 的 诱 变株， 酶 活 达 到 14. 878 、 16. 450 、 16. 400 U /mL ;2007 年高林 对 Bacillus cereus Shenzhen 754-1 进行培养条件的优化产 酶 水 平 提 高 至26 U /mL; 2010 年詹逸舒筛选到一株 Bacillus cereus Z-13 优化后卵 黄琼脂杯碟法测定磷脂酶 C 产生的沉淀圈 ( 乳白色沉淀圈 ) 直 径 可 达30 mm， 酶 活23. 31 U /mL 。 国 外对磷 脂 酶 C 的 研 究 一 直 处 于 领 先 。

3. 研究的基本内容与计划

1.引物设计与 rt-pcr扩增

2.4-乙烯基愈创木酚双加氧

3.重组蛋白 诱导表达

4.4-乙烯基愈创木酚双加氧酶蛋白的纯化与鉴定

4. 研究创新点

本实验将克隆到的人4-乙烯基愈创木酚双加氧酶全基因导入到原核表达载体pE T-32a( ) ,诱导表达获得大量4-乙烯基愈创木酚双加氧酶全长蛋白 融合蛋白带有 6 个组氨酸标签,可通过 N i-N TA 获得纯度较高的目的蛋白。