细菌来源酯酶的活性测定和改造开题报告

 2021-08-08 22:57:02

1. 研究目的与意义

酯酶(Esterase,EC3.1.1.X),是一类能够作用于酯键的水解酶类(Hydrolases),能够催化酯类进行水解、酯化、酯交换等反应[1],广泛存在于动植物和微生物中[2]。作为一种重要的生物催化剂,酯酶有着以下特性:(1)反应条件温和,反应速度快;(2)立体选择性强,催化专一性高;(3)可以催化某些特殊的功能基团,没有副反应,能够获得单一的产物;(4)催化反应属于环境友好型,对环境的污染很小

跟据来源的不同,酯酶可以分为植物性酯酶、动物性酯酶和微生物酯酶。几乎所有的动物器官内都有酯酶的存在,微生物酯酶的来源也很广泛,据报道,有多达65个属的微生物菌种能够生产酯酶,其中细菌有28个属,酵母菌10个属,放线菌包括4个属,以及其它真菌共计23个属。以上只是目前的研究结果,随着酯酶检测方法的改进,以及筛选技术的进步,相信将会有越来越多的产酶菌株被发现。

2. 国内外研究现状分析

1834年有报道关于兔胰脂酶,先后在1854和1871年分别报道过胃脂酶和植物种子脂酶,而微生物脂酶在20世纪初时才有报我国在20世纪六十年代就开展了微生物脂酶的研究,1969年我国研究者成研制了解脂假丝酵母脂酶制剂。

3. 研究的基本内容与计划

(1)文献查阅 了解酯酶特点 1-3周

(2)设计选择性培养基及培养条件,利用固体平板分离法,分离纯化产酯酶菌株;4-8周

(3)酯酶活性测定方法;8-12周

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4. 研究创新点

利用实验室原有的两个酯酶基因进行阳性克隆,将对其进行分子改造,并测定其活性。从细胞和分子水平,以蛋白表达、酶活力等多角度的研究思路,全方位、深层次研究突变酯酶的特性。构建变体,更深层次研究其活性。

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