1. 研究目的与意义
本实验将优化后碱性果胶裂解酶基因片段在与重组载体连接扩增后以毕赤酵母为宿主菌进行表达。
随着被发现碱性果胶酶在造纸纸浆、纺织等方面的应用,且野生菌株果胶酶表达酶活较低等因素,考虑采用分子生物学方法构建产果胶酶基因工程菌进行高效表达,为果胶酶的工业化生产提供参考及奠定一定的基础。
2. 国内外研究现状分析
国外近几年对果胶酶的研究主要集中在分子生物学领域,而国内则侧重果胶酶优良菌种的筛选及发酵条件的优化,基因工程菌的构建主要集中在细菌程度上,国内外果胶酶距工业化生产还有一定距离。
3. 研究的基本内容与计划
(1)建立果胶酶酶活分析测定方法
包括考察果胶酶的最适合反应温度、ph、最适反应底物和底物浓度。
(2)重组果胶酶基因工程菌的构建
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4. 研究创新点
以毕赤酵母密码子用法分析为根据优化目的基因,通过分子生物学的方式构建碱性果胶裂解酶的基因工程菌,选用毕赤酵母为表达宿主菌,将目的基因线性化倒入毕赤酵母菌染色体内,增强了其外源基因表达的稳定性,为高效表达碱性果胶裂解酶奠定一定的基础并为后续可能的工业化生产提供依据。
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