甾醇酯酶生产菌的筛选及其产酶条件的研究开题报告

1. 研究目的与意义

1）建立一种简易、快捷、特异性强的甾醇酯酶筛选方法

2）筛选得到产甾醇酯酶高的细菌和真菌菌株

3）研究菌种的发酵产酶条件，得到优化的产酶条件

2. 国内外研究现状分析

国内对甾醇酯酶的研究报道很少，国外对于甾醇酯酶的研究报道也主要来自于西班牙的M.J.Martnez和F.J. Plou等人的研究小组对于来自与担子菌Ophiostoma piceae的研究报道。该研究小组对Ophiostoma piceae的甾醇酯酶进行深入的研究，他们桉树中筛选得到这个菌株，然后这个菌株生产的甾醇酯酶酶学性质进行了细致的研究。他们的研究结果表明此甾醇酯酶对于水解三酸甘油酯和甾醇酯都有较高的酶活性。因此这个酶在解决造纸工业中的树脂障碍问题上具有很大的潜力。

对于甾醇酯酶今后的研究发展方向，除了还要继续筛选寻找新的产甾醇酯酶的菌种外，同时也要利用分子生物学和蛋白质工程的相关技术，对甾醇酯酶特性进行相关的改造，目的是得到耐高温和耐高PH值等极端条件的甾醇酯酶。因为在实际的生产过程中，我们更需要能够在高温和高PH值条件下发挥作用的甾醇酯酶。

3. 研究的基本内容与计划

1）从腐烂松木和杨木处取样，添加植物甾醇酯为碳源富集样品

2) 以植物甾醇酯为唯一碳源，罗丹明b为脂肪酶的显色剂进行平板初筛

3) 初筛出的阳性菌株发酵培养产甾醇酯酶，检测酶液的甾醇酯酶酶活，对菌株进行复筛

4. 研究创新点

本研究采用了天然植物甾醇酯作为唯一碳源作为筛选底物，筛选出来的甾醇酯酶对于水解造纸工业树脂障碍物质中的甾醇酯有天然的特异性。

本研究采用了以罗丹明B为显色剂的筛选方法，此方法相对于透明圈法和酸碱指示剂法特异性更高。