去N-糖基化对乙酰木聚糖酯酶活性以及稳定性的研究开题报告

1. 研究目的与意义

本研究利用生物技术的方法对乙酰木聚糖酯酶加以改造，通过定点突变在乙酰木聚糖酯酶的关键位点引入、删除糖基化位点，利用毕赤酵母表达系统高效表达胞外乙酰木聚糖酯酶，构建酵母工程菌株，系统地比较了突变体与野生型乙酰木聚糖酯酶在结构和功能上的区别，为获得高品质的商品乙酰木聚糖酯酶提供了新的思路，具有重要的理论意义和实际应用意义。

2. 国内外研究现状分析

国内外都没有对去n-糖基化对乙酰木聚糖酯酶活性以及稳定性的研究。

糖基化是真核生物蛋白质合成后的一种修饰方式，在维持蛋白质的功能及稳定性等方面发挥着重要的作用。虽然有研究发现，去糖基化会影响乙酰木聚糖酯酶的热稳定性及催化活性，但不同表达系统表达的乙酰木聚糖酯酶，糖基化程度不同，会有不同效果。

乙酰木聚糖酯酶作用是水解天然木聚糖中能去除乙酰木聚糖木糖残基上 c2和 c3的 o-乙酰取代基。使木聚糖的作用位点不被支链包裹，增加其活性。

3. 研究的基本内容与计划

⑴利用定点突变的方法去掉可能的糖基化位点，构建突变酶基因；

⑵研究温度对突变酶的酶活以及稳定性影响；

⑶研究ph对突变酶的酶活以及稳定性影响；

4. 研究创新点

通过定点突变，纯化培养等，筛选出高品质的去N-糖基化对乙酰木聚糖酯酶，系统地比较了突变体去N糖基化乙酰木聚糖酯酶在结构和功能上的区别，为获得高品质的商品去N糖基化乙酰木聚糖酯酶提供了新的思路。