耐热型酯酶产酶菌株的筛选开题报告

1. 研究目的与意义

酯酶是酶制剂中一种十分重要的品种，属于水解酶类，酯酶在广义上是指羧酸酯水解酶;狭义上指的是芳香酯酶，羧酸酯酶及乙酰酯酶。它的研究始于哺乳动物，相继在鸟类、鱼类和无脊椎动物均发现有酯酶的存在，特别是近年来对微生物酯酶的研究，对医药、农业、轻工业及军事业起到了巨大的推动作用，具有深远的意义。

随着酶学基础理论和应用研究的发展，酯酶的众多特性也被随之发现，酯合成、内脂合成、酯交换、多肤合成、立体异构体的转化和拆分等催化反应，酯酶催化不需要辅酶且具有反应条件温和、方法简便、催化活性高外、选择性强、产物易于分离、易于回收等优点，与酯酶相关的课题成为当前基础酶学和应用酶学研究的热点之一。

产酯酶的微生物在自然界中分布十分广泛，微生物细胞生物体内需要酯酶催化胞内脂合成及分解，以提供生理代谢之用，也就是实际上产酯酶的微生物远远多于目前所知道以及所报道的。原因之一是对酯酶的研究还不广泛、不深入、缺乏系统性，主要局限于经济意义上的种属，没有进行全面系统的研究;原因之二就是受到分析、检测手段等因素的限制，多数测定未使用准确的微量分析法，可靠程度不好，这就把产酯酶量低的菌株误认为不产酯酶。所以产微生物酯酶菌株还有待于进一步寻找和选育。并且对微生物酯酶的研究大多停留在初级阶段，特别是有针对性的对酷酶的酶学性质的研究还开展的不够，因此，大力开发酷酶的系统研究，扩大酯酶的应用面，尤其是酶的底物特异性、酶的构象变化、酶与底物的作用方式等方面的研究，及其酯酶的新用途、新的研究手段有待于进一步加强。

2. 国内外研究现状分析

国内外对微生物脂肪酶产生菌的筛选、酶的性质、酶的固定化、生产应用以及在分子基因水平上作了大量的研究。但在一些基本的性质上还缺乏系统的研究，微生物脂肪酶和微生物酯酶的定义和分类在某些文献报道中并没有加以严格的区分，把两者等同起来看待，虽然它们都是催化酯键的水解酶类，但实际上存在很大的差异，从酶的定义、分类，产生菌的筛选，酶的作用机制，底物的特异性，酶活的测定以及到应用方面都有不同, 脂肪酶优先水解长链的酯类而产生长链的脂肪酸，酯酶则优先水解短链的类，作用于水溶性的底物。

国内外对耐热型酯酶产酶菌株的筛选研究积极开展。已分离筛选得到多种耐热型酯酶产酶菌株，如产己酸乙酯酯化酶菌株红曲霉EM-56，胆固醇酯酶高产菌株Rhodococcus sp.等，并对它们产酶最适温度，pH等条件进行了深入研究。

3. 研究的基本内容与计划

（1）确定采样方案，从南京地区采集微生物样品；

（2）设计选择性培养基及培养条件，通过富集培养法，富集耐热型微生物；

（3）利用固体平板分离法，分离纯化产耐热型酯酶菌株；

4. 研究创新点

本论文对耐热型酯酶产酶菌株的筛选，对菌株产酶活力的研究，为耐热型酯酶高产菌株的筛选提出了重要的实践与理论依据。