多粘类芽孢杆菌抗菌肽分离纯化研究开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

课题意义：

多粘类芽孢杆菌是革兰氏阳性菌，其次生代谢产物中含有诸如抗菌肽等多种有益物质。由于抗菌肽分布广泛、分子量小、理化性质稳定以及不易产生抗药性等优点，在农业、工业、医药等行业发挥着重要的作用。由于目前抗生素的耐药性已对公众健康造成重大危害，而且在现代食品工业以及种植中，化学防腐剂及抗生素的不规范使用及残留隐患已越来越引起消费者关注，人们更倾向于消费天然来源的食品资源。因此，开发不易产生耐药性且无残留隐患的新型抗菌物质具有重要的现实意义，而作为天然来源的抗菌肽有望成为急需的替代品。因此，建立合理的分离纯化技术手段分离抗菌肽具有重要意义。

国内外研究概况：

2005年choi等人[1]将p. polymyxa e681的培养液离心后，利用甲醇抽提菌体细胞得到fusaricidins抗生素的粗提物，随后通过高效液相色谱法（hplc）分离到3个活性峰，再经液相色谱-质谱联用仪（lcms）分析各活性峰所含抗菌物质分子量及氨基酸序列。

2. 研究的基本内容和问题

研究目标为建立一系列合理、高效的分离纯化技术手段从而从多粘类芽孢杆菌的发酵液中分离纯化抗菌肽。主要研究内容有：

1、通过ph变化情况测定多粘类芽孢杆菌最佳发酵时间。

2、通过抑菌试验（抑菌圈的直径表示发酵液的抗菌活性）测定待测样品的抗菌活性。

3. 研究的方法与方案

采用发酵罐发酵多粘类芽孢杆菌使其发酵产生抗菌肽，每隔一段时间取样，通过抑菌试验测定发酵液的抗菌活性。放罐后进行抗菌肽的分离纯化实验。拟采用的实验流程为：

多粘类芽孢杆菌的发酵

发酵液硅藻土吸附，布氏漏斗过滤取上清

4. 研究创新点

相比于实验室水平的抗菌肽的分离纯化，本课题是基于发酵罐水平研究抗菌肽的分离纯化，为抗菌肽的工业化生产奠定一定的基础，本课题实验致力于建立一系列的分离纯化方法，提高抗菌肽的分离纯化水平。

5. 研究计划与进展

2015年12月-2016年1月初 定时测定发酵液的抗菌活性，确定多粘类芽孢杆 菌的最佳发酵时间

2016年1月-2016年4月 探究并建立最适的分离纯化抗菌肽的方法