1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
本课题的意义：从心肌组织中提取天然的h-fabp，能最好的还原天然蛋白的结构和功能，但产率低且不易纯化，使h-fabp的应用受到了限制。
如今原核、真核表达载体的构建已经较为成熟，可利用rt-pcr技术获得人胎心肌组织中的h-fabp基因片断，并构建h-fabp的原核、真核表达载体，从而得到重组表达质粒。
经大肠杆菌或酵母等转化表达从而获得h-fabp，比较原核、真核两种表达系统生产的h-fabp产量及活性，可以为我们大量生产h-fabp找到最合适的方法。
2. 研究的基本内容和问题
研究的目标：优化生产h-fabp的方法，用于抗h-fabp抗体的制备以及结构和功能的研究，为急性心肌梗死的临床诊断打下基础，同时也为h-fabp 检测试剂盒的研发奠定基础。
研究的内容：利用rt-pcr技术获得人胎心肌组织中的h-fabp基因片断，并构建h-fabp的原核、真核表达载体，从而得到重组表达质粒。
经大肠杆菌或酵母等转化表达从而获得h-fabp，比较原核、真核两种表达系统生产的h-fabp含量及活性。
3. 研究的方法与方案
研究方法：利用rt-pcr技术获得人胎心肌组织中的h-fabp基因片断，并构建h-fabp的原核、真核表达载体，从而得到重组表达质粒。
经大肠杆菌或酵母等转化表达从而获得h-fabp，比较原核、真核两种表达系统生产的h-fabp产量及活性。
实验方案：从ncbi上调取h-fabp基因序列，进行引物设计；提取心脏组织rna；逆转录成cdna；以设计好的引物对h-fabp基因序列进行pcr扩增；选择合适的载体及酶切位点对载体进行酶切；目的基因片段与载体连接；重组质粒转化入dh5α；对转化完成的dh5α进行酶切鉴定及菌落pcr鉴定；对重组质粒进行测序；将测序结果符合要求的重组质粒转入bl21中；使用iptg诱导进行小量表达，比较其在不同浓度iptg、不同温度下的表达量的差异以及所产蛋白的溶解性；测定表达出的h-fabp的浓度。
4. 研究创新点
随着医学技术的发展，早期开通梗死相关血管已成为ami患者的当务之急，研究认为ami患者每延迟开通血管治疗1h，其患者的死亡率可能增加21，因此，如何早期明确诊断，是目前临床工作者面对的最大难题，传统的临床目前公认的心肌损伤标志物ct n i 及ck-mb具有较高的特异性，但它们的敏感性不尽如人意，它们在心肌损伤6小时左右才开始升高，明显影响了临床的早期诊断。
而h-fabp作为在心肌中含量最丰富的蛋白之一，其独特的低分子量，独特的心肌损伤后漏出速度，使其可以在心肌损伤后4小时左右检出，是一种特异性高、敏感性强的标志物，明显优于ctni 、ck-mb及肌红蛋白，因此，获得高质量的h-fabp蛋白尤为关键。
本实验探讨一种获得h-fabp的方法，具有一定的创新性。
5. 研究计划与进展
2014年9月~2014年11月：查阅文献，设计实验方案2014年12月~2015年3月：进行实验，包括从NCBI上调取H-FABP基因序列，进行引物设计；提取心脏组织RNA；逆转录成cDNA；以设计好的引物对H-FABP基因序列进行PCR扩增；选择合适的载体及酶切位点对载体进行酶切；目的基因片段与载体连接；重组质粒转化入DH5α；对转化完成的DH5α进行酶切鉴定及菌落PCR鉴定；对重组质粒进行测序；将测序结果符合要求的重组质粒转入BL21中；使用IPTG诱导进行小量表达，比较其在不同浓度IPTG、不同温度下的表达量的差异以及所产蛋白的溶解性；测定表达出的H-FABP的浓度等。
2015年4月~2015年5月：总结数据，撰写论文。
