大叶冬青苦丁茶多糖的提取、分离与纯化开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

我国为产茶大国，有丰富的天然资源。茶叶中含有多种生物活性成分，其中茶多酚（儿茶素）、茶氨酸和茶多糖这三大提取物已得到广泛的重视。在我国，就产量多少和应用广泛程度而言，除了茶以外，位居其次的便是苦丁茶。苦丁茶在民间因原植物来源不同分为大叶苦丁茶及小叶苦丁茶。大叶苦丁茶的原植物来源为大叶冬青及苦丁茶冬青，为冬青科常绿乔木，主要分布于我国浙江、江苏、安徽、福建、广东、广西等省区。大叶冬青苦丁茶系冬青科冬青属常绿乔木，是我国华南地区的传统产品和特产，距今已有2000年的生产和饮用历史，自然分布于我国长江流域以南地区。明代李时珍所著《本草纲目》中便有记载其主治:煮饮，止渴、明目、除烦，令人不唾，消痰利水，通小说肠，治淋，止头痛烦热，噙咽，清上膈，利咽喉。在现代，大叶苦丁茶因其所具有的先苦后甜的独特口感，以及对治疗高血压、口腔炎、咽喉炎、肥胖症、急性肠胃炎等疾病的独特疗效，使其在国内及东南亚、欧美等地大受欢迎。现代医学证明，大叶冬青苦丁茶具有清热解毒、消炎杀菌、止咳化痰、健胃消积、明目益思、降胆固醇、降血压、降血脂、抗疲劳、抗衰老等药用保健功能。

以往对苦丁茶生物活性成分的研究主要集中在三萜类化合物、皂苷类化合物、多酚化合物以及挥发性成分的分析等方面。近几年来，在苦丁茶提取工艺方面的研究越来越多。如吴晓鹏等[13]采用单因素和正交试验对苦丁冬青苦丁茶多糖提取工艺进行了优化，并研究发现苦丁冬青苦丁茶多糖对羟自由基、超氧阴离子自由基、dpph自由基具有一定的清除作用，对h2o2诱导的红细胞氧化溶血反应和红细胞自氧化溶血反应都有显著的抑制作用。何玲玲等[14]采用95%乙醇脱脂、水提取及80%乙醇沉淀的方法，从苦丁茶冬青叶中分离得到苦丁冬青苦丁茶粗多糖，经过特征化学反应及紫外光谱、红外光谱分析，确定了提取物为多糖类化合物，且含有一定量的蛋白质。最近，sun等[15]对苦丁冬青苦丁茶多糖的提取、纯化、体外抗氧化活性等进行了初步研究，结果表明粗多糖及其纯化组分对超氧阴离子自由基、羟自由基、dpph自由基具有一定的清除作用和螯合金属离子的能力。王新等[3]采用气相色谱法(gc)分析了苦丁冬青苦丁茶多糖的单糖组成，结果表明多糖组分主要由阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖和葡萄糖组成。我国大叶冬青苦丁茶资源较丰富，但对其茶多糖的研究报道不多，特别是其高级结构与药理作用关系、其作用机制等方面，均有待更深入的研究。

大叶苦丁茶在我国分布范围广泛，据初步估计，全国年产茶叶千吨以上。大叶苦丁茶嫩芽、嫩梢、老叶、树皮树根、果壳种子、花均能制成中药或加工成茶饮品，还可以进行精深加工，开发成新型药品、食品、保健品等产品，在国内外均具有广阔的市场潜能和开发前景。随着对大叶冬青苦丁茶茶多糖研究的不断深入，其茶多糖将会有较好的临床实际应用前景。茶多糖具有多种药理作用，目前对茶多糖生物活性和药理作用的研究主要集中在降血糖、降血脂、免疫调节、抗血栓、抗血凝等方面。由于目前国内消费水平的不断提高，人们对健康的生活方式日愈重视。

2. 研究的基本内容和问题

研究的目标、内容和拟解决的关键问题

本研究是建立大叶冬青苦丁茶茶多糖提取、分离与纯化方法。

经过查阅学习相关文献，我进一步了解有关实验过程中的理论和方法，设计并进行实验。通过热水提取法对茶叶中茶多糖进行提取，用分光光度计测量粗茶多糖含量，然后利用deae纤维素胶对粗茶多糖提取液进行柱层析得到纯茶多糖组分，采用以下方法分析测定纯茶多糖：硫酸苯酚法测量其总糖含量；间羟联苯法测量其糖醛酸含量以及其硫酸基含量的测定。

拟解决的关键问题

1.得出大叶冬青苦丁茶多糖生物活性物质的最佳提取条件

3. 研究的方法与方案

1大叶苦丁冬青苦丁茶粗多糖的制备

将大叶苦丁冬青苦丁茶磨碎，过80目筛，称取粉碎茶样200g，用15倍体积的85%乙醇、80℃回流提取3次，每次1h；5000r/min离心15min，残渣用20倍体积的去离子水进行热提取3次，水浴温度90℃，每次提取时间3h。提取液离心、合并3次上清液，置旋转蒸发仪50℃减压浓缩至初始体积的1/4，加入3倍浓缩液体积的无水乙醇，混匀，静置12h，离心得沉淀。沉淀经真空冷冻干燥，得到ikps粗品。

2大叶苦丁冬青苦丁茶多糖的分离纯化

4. 研究创新点

本实验的创新之处在于选择大叶冬青苦丁茶茶叶的茶多糖作为研究对象，建立提取、分离与纯化方法，得到高纯度的多糖组分，并对茶多糖的生理及理化性质进行研究。本项研究为今后进一步研究大叶冬青苦丁茶茶多糖的免疫活性及肠道功能的影响奠定基础。

5. 研究计划与进展

2013年10月11