角蛋白降解菌高产二硫键还原酶的发酵条件优化开题报告

 2022-01-23 20:35:46

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

本课题的意义

我国既是饲料生产大国,亦是畜禽养殖大国。在畜禽养殖过程中,产生大量的屠宰废弃物,其中羽毛、羊毛、蹄、角等是自然界中最主要的角蛋白资源。家禽的羽毛产量最高,占鸡体重约5%~7%,年产约70万吨,它们含有丰富的蛋白质和氨基酸,粗蛋白含量90%以上,羊毛亦如此。随着畜牧业的飞速发展,尤其是集约化养殖的大规模应用,羽毛和羊毛的产量更加丰富,角蛋白资源的开发利用已受到广泛关注。

但是在角蛋白资源的利用中面临着一个难题,角蛋白中含有较多的胱氨酸,他们之间形成大量的二硫键,再加上氢键和分子间作用力,普通蛋白酶并不能将其降解。一直以来,羽毛和羊毛大部分被用来生产羽绒制品,而劣等羽毛、羊毛以及下脚料,常被废弃或经物理化学方法处理后添加到饲料中,这些方法存在利用率低、易造成环境污染、氨基酸破坏严重等诸多不足[1]

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2. 研究的基本内容和问题

本实验选用羽毛粉作为底物,采用单因子实验设计对产二硫键还原酶的菌株部分培养基和生长因素进行优化,确定影响产酶发酵的关键。

二硫键还原酶的生产受发酵条件和培养基成分的影响,例如温度、ph、碳源、氮源以及金属离子等,并且这些因素的作用在不同物种间差异很大。所以,发酵条件和培养基成分的确定对微生物发酵产酶具有重要意义。本试验着重对发酵温度、ph以及碳、氮源进行了研究。

筛选出的菌株放置一段时间后要重新活化,扩大培养,活性可能有所影响。

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3. 研究的方法与方案

1、高二硫键还原能力角蛋白降解菌的筛选

样品前处理、富集培养角蛋白降解菌的分离角蛋白降解菌的初筛角蛋白降解菌的复筛菌株鉴定挑选三株菌进行角蛋白酶活性、二硫键还原酶活性、可溶性蛋白含量和巯基产量四个指标监测选取高二硫键还原能力好的菌株

2、菌株的重新活化,扩大培养。

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4. 研究创新点

本实验选用羽毛粉作为底物,采用单因子实验设计对产二硫键还原酶的菌株部分培养基和生长因素进行优化,用以确定影响发酵的关键。目前,关于高二硫键还原能力角蛋白降解菌方面的研究内容不是很广泛,本实验旨在筛选具有高二硫键还原能力的角蛋白降解菌以及对其发酵条件优化进行研究。

5. 研究计划与进展

研究从2016年8月开始,预计在2017年4月结束实验。预期进展是筛选出两株高二硫键还原能力角蛋白降解菌菌株绿脓杆菌。目前正在进行发酵过程ph变化和生物量变化的实验。

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